Хеликс и их иммуноблот

[Gleb]

Добрый день.

Есть подозрение, что Хеликс врет, и их анализ иммуноблот таковым не является (даже если его выполняют добросовестно). Вопрос: может ли кто подтвердить или опровергнуть это подозрение?

Сдал анализ иммуноблот на G-антитела в Хеликс.
Результаты такие.

Результаты показались мне странными. Задал вопрос, кто производитель теста. Получил в письме следующий ответ:

Производитель данной тест-системы ООО «ОМНИКС», Россия, Санкт-Петербург

На письма мои отвечали оперативно, до письма, которое я привожу ниже. Ответом на него стала тишина.

Спасибо за разъяснения!
И все же, я не получил ответа на свой исходный вопрос: какой конкретно тест использовался для анализа? Если у вас нет возможности дать подробное описание, укажите, пожалуйста, артикул производителя, я буду адресовать свои вопросы ему.

У меня есть причины считать, что это не иммуноблот:

1. На сайте "Омникс" нет ни одного блот-анализа - только ИФА ( http://omnix.ru/index.php?option=com_content&view=article&id=50&Itemid=58 ).
2. Данные в моем анализе похожи на тест KS-006. Он, очевидно, не является блот-анализом. Иммуноблот должен включать электрофорез геля и ряд других специфичных шагов (см., например, тут: http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/wb-beginner.pdf ).
3. Не ясно, что в анализе означают референсные значения. Они приведены без единиц измерения! Если это вестерн блот, отметка или есть на полоске, или ее нету. См, например, тут: http://www.euroimmun.de/fileadmin/template/images/pdf/DN_2131_I_UK_A06.pdf
4. Типовая диагностика G-антител на боррелии включает, по меньшей мере, 10 белков, а в моем анализе 4. См, например: http://www.cdc.gov/lyme/resources/Halperin_2012_Chap4_JohnsonB.pdf

 

[Vatrushka]

Единственное упоминание о блоте ООО"Омникс" :

Article:

Для этиологического подтверждения диагноза ЛБ всем больным проводили определение IgM и IgG к боррелиям в ИФА. Использовали тест-системы «ЛБ-ИФА-IgМ» (ФСП 42-0530-5323-04) и «ЛБ-ИФА-IgG» (ФСП 42-05330-5322-04) производства ООО «Омникс», г. Санкт-Петербург. Также проводили выявление антител класса IgM и IgG к боррелиям методом иммунного блоттинга. Специфические антитела классов IgM и IgG в иммунном блоттинге определяли с помощью тест-систем «ЛБ-иммуноблот-IgM» и «ЛБ-иммуноблот-IgG» (ООО «Омникс», г. Санкт-Петербург), с использованием в качестве антигенов набор рекомбинантных белков боррелий: p35, p41i, OspC, DbpA, OspA, p66 и в модификации – p41i,VLSE, OspC, DbpA, OspA, p66.

Source: http://medical-diss.com/medicina/kliniko-patogeneticheskie-aspekty-porazheniy-sustavov-vozbuditelyami-bakterialnoy-prirody-sovershenstvovanie-laboratornoy

файл для скачивания автореферата test.vak.ed.gov.ru/common/img/uploaded/files/BurgasovaOA.doc

 

[Gleb]

Я послал письмо в Омникс с вопросом, есть ли у них такой тест. Ответа тоже пока нет.
На мои вопросы вполне могут быть ответы:
1. Омникс не обновляет сайт.
2. Используется тест, отсутствующий в широкой продаже.
3. Интенсивность штрихов на полоске не возбраняется снимать спектрометром.
4. Что не выяснил состав белков заранее - сам дурак.

Но уж очень протокол похож на описанный к этому анализу: http://omnix.ru/materials/ifa-spektr-IgG.pdf
Как я понимаю, это что-то среднее между ИФА и вестерн блотом, но никак не последний.

 

[Vatrushka]

Есть анализ т.н. Иммуночип(серологическая диагностика клещевого боррелиоза ,методом иммуночипа)
Так вот, принцип его тоже что-то среднее между ИФА и Блотом. Разделены белки(как в блоте) но на микропланшете(как в ИФА), а связывание антиген-антитело определяется методом флюоресценции(как в РИФ) , и измеряется интенсивность анализатором(как в Ифа) , тоже есть цифровое обозначение, наверное это коэфициент позитивности(в блотах так тоже может быть, в некоторых странах официально выдают такие циферки в блоте). НО-они иммуночип по кр.мере не называют иммуноблотом
В блоте результат определяет чаще (зависит от производителя) лаборант(да или нет, глазом своим) и антигены нанесены на стрип(бумажку)
Эта диссертация, с упоминанием ЛБ блота Омникс, от 2011г.

Читала, что скоро все лаборатории обяжут писать название тест-системы и анализаторов, если используются, на результатах анализов. в анализах на некоторые инфекции уже обязали.
Электрофорез для разделения М и G (если вы про это) и в Ифа применяют.

 

[Vatrushka]

Вот похоже что ваш анализ и есть этот KS-006 «Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgG»(набор реагентов, применяющийся в качестве подтверждающего теста на наличие специфических иммуноглобулинов класса G к Borrelia burgdorferi s.l. в сыворотке (плазме) крови человека методом иммуноферментного анализа.)В наборе используется панель рекомбинантных антигенов раздельно сорбированных в лунках планшета.
Да точно он, только с 4-я белками.
Ну тогда его наверное можно выдавать за"экономный" блот, с флюоресцентной(скорее ферментной) детекцией. Как иммуночип))
Ох уж эти российские изобретатели..

 

[Gleb]

Спасибо за комментарии! Они согласуются с моими выводами.
Но я не согласен, что это можно выдавать за блот, тем более экономный.
По описанию, процедура с обработкой, выдерживанием и сравнением 4 пар образцов выглядит даже более трудоемкой, чем вестерн-блотинг.
Ключевой момент - отсутствие процессов разделения белков в сыворотке. Как я понял, именно разделение белков образца и делает вестерн-блот более качественным анализом, чем традиционный ИФА. А тут сыворотку проверяют на 4 антигена, но без разделения.

Вот тут Helix явно использует термины "Иммуноблотинг" и "Вестерн блот" относительно этого анализа: http://www.helix.ru/kb/item/07-067

Да, действительно, метод анализа KS-006 должен показывать наличие специфичных антигенов. Он, теоретически, может быть даже лучше (должен быть более универсальным, вне зависимости от штамма боррелий). То есть, вестерн блот является иммуноферментным анализом (он же анализирует ферменты иммунного ответа), но обратное - не верно.

Хоть википедию возьми, хоть любой протокол вестерн блота (и кстати, южного, северного, восточного и прочих блотов это тоже касается) - везде разделение белков в геле электрофорезом. И само слово "блот" означает детекцию пометок на стрипе.

Целью-то моей является не придирка к термину, а качественный и надежный анализ. И я подозреваю, что его не получил (и не только я, похоже).
Вестерн блотинг - изученная признанная техника. А тут чего - не понятно. Мне говорят "мы разводим кровь березовым соком, а антигены определяет по запаху обученный выхухоль, и называется это русский иммуноблот". То есть, пока это наши спекуляции, а лаборатория молчит.

Я не могу контролировать качество проведения анализа или реагентов, но за метод спрошу по полной . Поправиться бы только...

 

[Vatrushka]

https://borrelioz.com/forum/threads...na-sobstvennoj-praktike.103/page-4#post-25467
Там в посте ссылка, в ней есть полное описание методики иммуночипа, и кажется "хеликсовско-омниксовский блот" весьма похож))

 

[Vatrushka]

Ключевой момент - отсутствие процессов разделения белков в сыворотке. Как я понял, именно разделение белков образца и делает вестерн-блот более качественным анализом, чем традиционный ИФА. А тут сыворотку проверяют на 4 антигена, но без разделения.

. Это главный принцип блота(только разделяют белки не в сыворотке, а заранее они разделены производителем). Может они не указали это разделение? Т.е как бы они собирались давать ответ? если один белок сработает, как узнать какой именно из 4 связался с антителом? Думаю просто в кратком описании об этом не сказали.

вот из их инструкции (Ифа- спектр IgG от "Омникс"):
В наборе используются рекомбинантные белки боррелий p41i, OspC, Vlse, DbpA различных геномовидов, раздельно сорбированные в лункахстрипов.Тест-система позволяет качественно и полуколичественно интерпретировать результаты,предназначена для подтверждения положительных результатов ИФА
7.1. Результаты анализа для каждого антигена
интерпретируются индивидуально.
А вот на стрипе они намазаны, или на микропланшете, или в лункострипах лежат, а также ферментная детекция-не знаю является ли это принципиальным отличием блота. Может является?
Т.к. недаром этот KS-006, на сайте Омникс, не именуется блотом, хотя указаны определенные , раздельные , белки.
А за терминологию можно хорошенько докопаться!!

 

[SEREJA_LEO]

Вопрос автору темы. А вы болеете боррелиозом, другие анализы показывают другую картину по этим антителам?

 

[Vatrushka]

Пришли результаты

Николай , почитайте начало этой темы.
Ваш анализ выполнен лабораторией Хеликс. На форуме очень много курьезов с этой лабораторией.
У участников с положительными анализами из других лабораторий, Хеликс выдавал строго отрицательно. Доверия им нет.
Пересдавайте обязательно. Чтоб выполненый анализ был НЕ ХЕЛИКС.

 

[Lana]

И еще Николай: в вашем блоте всего пр 4 белка. А в других лабораториях 10, 14 белков. Разницу улавливаете? Если у вас эти 4 белка отрицательные - то 10 других могут быть положительные.

Читайте форум, тут все написано, какие лаборатории заслуживают доверие, какие нет.

 

[Николай]

А как узнать где именно, не менее 10, 14 белков диагностируют?

 

[Vatrushka]

А как узнать где именно, не менее 10, 14 белков диагностируют?

http://zbural.ru/price/250.html вот посмотрите в вашем городе есть еще Иммуноблот. К сожалению пока не увидишь бланк самого анализа, не поймешь, что они предлагают. Или спрашивать лаборантов что именно за тест используют.
Я еще по ценам смотрю. У Хеликса блот самый дешевый. У Инвитро , Дитрикс дорогой(1200)импортный , но только на 1 геновид (старый блот).
А в ЦМД есть иммуночип, аналог блота, у него куча белков и цена низкая . Но посмотрела в Екатеринбурге нет этой лабы.

 

[Vatrushka]

А как узнать где именно, не менее 10, 14 белков диагностируют?

Эта земская больница тоже с Хеликсом работает

Спросите Hellena из Кирова, какой иммуноблот они делают свои больным Бл! Может быть в Киров на диагностику

 

[Vatrushka]

Добрый день.

Есть подозрение, что Хеликс врет, и их анализ иммуноблот таковым не является (даже если его выполняют добросовестно). Вопрос: может ли кто подтвердить или опровергнуть это подозрение?

Вот тут Helix явно использует термины "Иммуноблотинг" и "Вестерн блот" относительно этого анализа: http://www.helix.ru/kb/item/07-067

за терминологию можно хорошенько докопаться!!

Вода камень точит.- клиенты жалуются (наверное поэтому)
Теперь Хеликс называет свой бывший "иммуноблот" подтверждающий ИФА.
http://www.helix.ru/kb/item/07-067

 

[Sergei]

Вот похоже что ваш анализ и есть этот KS-006 «Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgG»(набор реагентов, применяющийся в качестве подтверждающего теста на наличие специфических иммуноглобулинов класса G к Borrelia burgdorferi s.l. в сыворотке (плазме) крови человека методом иммуноферментного анализа.)В наборе используется панель рекомбинантных антигенов раздельно сорбированных в лунках планшета.
Да точно он, только с 4-я белками.
Ну тогда его наверное можно выдавать за"экономный" блот, с флюоресцентной(скорее ферментной) детекцией. Как иммуночип))
Ох уж эти российские изобретатели..

Позвольте реанимирую эту тему.

Довелось мне прочитать внимательно инструкции и к KS-005 «Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgM» и к KS-006 «Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgG».

Вроде как получается, что антигенов то там не по 4 в каждой тест системе, а аж по 10!

Только в для целей интерпретации результатов анализов и последующей диагностики наличия\отсутствия заболевания это, видимо, мало что даёт, т.к. они зачем-то смешали в каждой лунке белки одного вида, происходящие от где трёх, а где - двух геномовидов боррелий. Ценность же всяких полновесных "-блотов", если я правильно понимаю - именно в том, чтобы выловить в анализах иммунный ответ организма по каждому лабораторно доступному (в соответствующей тест-системе) виду антигена каждого патогенного для региона укуса геномовида боррелий.
Если я ошибаюсь - поправьте меня, плиз...

Вот что довелось "раскопать" в инструкциях ООО "Омникс" (производитель) к указанным выше тест-системам:

а вот про интерпретацию результатов:

т.е. итоги тестирования/анализов подводят по АНТИГЕНАМ, которых, "замешанных в компот" действительно как бы получается уже 4, а не 10.
а жаль.
Если я что-то не так понял - прошу указать на ошибки.

 

[Sergei]

Да, вот ещё что.
Чуть не забыл про ещё один любопытный нюанс.
Обнаружилось следующее явное несоответствие между пдф-инструкциям к этим двум тест-системам (KS-005 «Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgM» и к KS-006 «Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgG») и их описанием на сайте ООО "Омникс" (производителя)

В описании товарных позиций указано на то что видов антигенов не 4, а аж 6 !!!

вот и попробуй пойми где ошибка - в описании на сайте или в инструкции к тест-системе.

Смотрите сами:

Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgM
Боррелиоз-ИФА-Спектр-IgG

т.е. Vlse, OspC, DbpA, p39, p100 и p41i (в описании на сайте) против Vlse, OspC, DbpA и p41i (в инструкциях).

Как то так.