1. Этот сайт использует файлы cookie. Продолжая пользоваться данным сайтом, Вы соглашаетесь на использование нами Ваших файлов cookie. Узнать больше.
Скрыть объявление
Немецкие анализы на боррелиоз и сопутствующие инфекции

В России появилась возможность выполнять лабораторные анализы на боррелиоз и ко-инфекции в немецкой лаборатории ArminLabs

Подробнее...

Вестерн-блот (Western blotting)

Тема в разделе "Обсуждение эффективных методов диагностики", создана пользователем Kristi, 7 авг 2012.

  1. Kristi
    Оффлайн

    Kristi Администратор

    Сообщения:
    1.112
    Симпатии:
    1.064
    Анализ Вестерн-блот считается более точным в диагностике боррелиоза. Это аналитический метод, используемый для определения специфичных белков в образце. На первом этапе использует электрофорез белков в полиакриламидном геле для разделения денатурированных полипептидов по длине или по трехмерной структуре белка. Далее белки переносятся на нитроцеллюлозную мембрану или PVDF, затем детектируются с использованием антител, специфичных к заданному белку.

    Отличие Вестерн-блоттинга от иммуноферментного анализа заключается в том, что в случае серологического исследования происходит определение общего количества антител (специфических и неспецифических) против всех антигенов Borrelia Burgdorferi (специфических и неспецифических). Тест на выявление антител может быть положительным за счет наличия антител против неспецифических антигенов.

    Методика вестернблота является высокоспецифичной. Она позволяет определять наличие специфических антител против различных BorreliaBurgdorferi специфических антигенов, при этом можно исключить влияние перекрестных реакций на различные неспецифические антигены Borrelia Burgdorferi.

    Дополнительная информация:
    Боррелии IgG Вестерн-блот (Anti-Borrelia EUROLINE-WB (IgG))
     
    Последнее редактирование модератором: 15 июн 2015
    Klever нравится это.
  2. Kristi
    Оффлайн

    Kristi Администратор

    Сообщения:
    1.112
    Симпатии:
    1.064
    Вестернблот для определения IgGи IgMантител против различных антигенов BorreliaBurgdorferi. Анализ получаемых на тестовой мембране полосок и интерпретация результатов.
    Пороговый уровень - Стандарт: IgM/IgA - 10 %, IgG - 20 %
    С помощью данного Вестерн блота в сыворотке крови могут быть обнаружены соответствующие антитела к следующим антигенам:

    93 kD – белок из мембранных везикул наружной поверхности BorreliaBurgdorferi. Иммунный ответ против данного белка высоко специфичен. В большинстве случаев можно регистрировать наличие только IgG антител против данного антигена. Антиген p93 является типичным маркером поздней или хронической фазы заболевания. Данные антитела очень часто идентифицируются в сыворотке пациентов, имеющих клинические симптомы артрита при боррелиозе. Иногда в острой стадии боррелиоза определяются IgM антитела против антигена p93. В таможно предполоком случае можно сделать предположение о большой вероятности перехода болезни Лайма в хроническое течение.

    62-72 kD – тепловой шоковый протеин. Эти белки являются неспецифичными для Borrelia Burgdorferi, отмечается перекрестная реакция ко множеству других бактерий. Однако выявление антител к данным антигенам 62 kD и 72 kD имеет диагностическое значение, когда одновременно обнаруживаются антитела к антигену p93. Это является подтверждением хронической стадии заболевания. Заключение: наличие широких полосок на мембране вестернблота между 60 и 93 kD является весомым подтверждением диагноза болезни Лайма, хроническая стадия с вытекающей необходимостью проведения специфической терапии.

    60 kD – общий антиген. Неспецифический антиген. Отмечается высокая частота перекрестных реакций с другими бактериями.

    48 kD – данные о специфичности данного антигена противоречивы, однако выявление антител к данному антигену поддерживает диагноз боррелиоза.

    41 kD – белок флагеллин. Является неспецифическим для Borrelia Burgdorferi. Доказана высокая частота перекрестных реакций на множество бактерий. Несмотря на это, является очень важным и полезным маркером, потому что антитела к данному антигену выявляются в очень ранней стадии заболевания. Например, в ранней стадии боррелиоза зачастую отмечается наличие только IgM антител против антигена p41 и высокоспецифичного антигена Osp C белка, что позволяет диагностировать раннюю стадию болезни . Однако, если другие специфические антитела не определяются, данная находка может быть затруднена в интерпретации, особенно при анализе IgG Вестрен блота.

    39 kD – белок p39. Высоко специфичный антиген для Borrelia. Маркер ранней стадии инфицирования. К данному антигену могут выявляться IgM антитела. Если имеется выраженная реакция против антигена Флагеллина, бывает довольно трудно дифференцировать на мембране блота полоску на уровне 39 kD от полоски на уровне 41 kD.

    37 kD – специфичность не очень выражена, однако выявление антител к данному антигену поддерживает диагноз болезни Лайма

    34 kD – OspB(белок B наружной поверхности). Высоко специфичен для Borrelia Burgdorferi.

    31 kD – OspA (белок A наружной поверхности). Высоко специфичен для Borrelia Burgdorferi. В ряде популяции имеется выраженная экспрессия данного антигена и, соответственно, перекрестная и неспецифические реакции. В этих случаях данный антиген не является высокоспецифичным маркером.

    30 kD –Высоко специфичный для Borrelia Burgdorferi антиген. Функция не установлена.

    29 kD – OspD (белок D наружной поверхности). Высоко специфичен для Borrelia Burgdorferi. Чаще выявляются IgM антитела, чем IgG антитела, поэтому является хорошим маркером острой фазы болезни Лайма.

    21 kD – вероятно принадлежит OspC комплексу. Высоко специфичен для Borrelia Burgdorfer. Маркер ранней стадии болезни Лайма.

    18 kD – данные о специфичности данного антигена противоречивы. При выявлении антител только к данному антигену, диагноз болезни лайма не правомочен.

    Дополнительная помощь в интерпретации (от производителя)

    IgG антитела могут выявляться против всех упомянутых выше антигенов. Для положительной интерпретации теста необходимо выявление на мембране блота как минимум 2 полосок (антигенов), трактуемых как специфические, и 2 других неспецифических полосок.

    Выявление 1 специфической полоски на мембране блота недостаточно для положительной интерпретации теста, однако при наличии на мембране блота также 4 неспецифических полосок вероятность положительного заключения делается высоко вероятной. При наличии на мембране блота широкого спектра полосок выше 60 kD вместе с одной специфической полоской свидетельствует о диагнозе поздней стадии хронического баррелиоза (Болезнь Лайма, хроническая стадия, поздняя стадия).

    IgGположительный тест:
    наличие 2 высокоспецифичных полосок и 2 неспецифичных полосок
    наличие 1 высокоспецифичной полоски и 4 неспецифичных полосок

    IgG пограничный тест:
    наличие 2 высокоспецифичных полосок и 1 - 2 неспецифичных полосок
    наличие 1 высокоспецифичной полоски и 2 - 3 неспецифичных полосок
    отсутствие высокоспецифичных полосок и наличие 5 неспецифичных полосок
    CDC критерии (не подтвержденные для данного теста):

    Положительный тест - наличие на мембране блота 5 из следующих полосок:
    21, 25, 28, 30, 39, 41, 48, 60, 62, 93 kD

    Сомнительный тест - наличие на мембране блота менее 2 вышеперечисленных полосок

    IgM антитела в основном направлены против следующих антигенов Borrelia Burgdorferi:
    18, 21, 25, 31, 34, 39, 41 kD
    Выявление 2 из вышеперечисленных полосок на мембране блота свидетельствует об активной стадии болезни Лайма (острая стадия).

    Выявление IgM антител только против 1 из антигенов Borrelia Burgdorferi 21 kDили 25 kD также свидетельствует об активной стадии болезни Лайма (острая стадия).

    IgM положительный тест:
    наличие 1 полоски (21 kDили 25 kD)
    наличие 1 полоски 41 kD и одной из следующих полосок 18, 21, 25, 28, 29, 30, 31, 34, 37, 39, 48, 93 kD
    наличие 2 или более высокоспецифичных полосок

    IgM пограничный тест:
    наличие 1 полоски 41 kD
    наличие 1 из следующих полосок 28, 30, 34, 39, 93 kD
    CDC критерии (не подтвержденные для данного теста):

    Положительный тест - наличие на мембране блота 2 из следующих полосок:
    21, 25, 28, 37, 41, 48, 60, 93 kD

    Сомнительный тест - наличие на мембране блота менее 2 вышеперечисленных полосок.
     
    Лола Ололошкина нравится это.
  3. Kristi
    Оффлайн

    Kristi Администратор

    Сообщения:
    1.112
    Симпатии:
    1.064
    Существуют следующие ограничения данного метода диагностики:
    • Результаты теста должны анализироваться только в контексте общей клинической картины и других лабораторных исследований.
    • Наличие у пациента вируса Эбштейн-Барр может вызывать поликлональную стимуляцию B-клеток с повышением титра антител против Borrelia Burgdorferi при отсутствии активного заболевания. Поэтому при наличии положительного результата теста Вестерн блот Borrelia Burgdorferi и отсутствии клинических признаков заболевания необходимо исключить наличие инфекции вируса Эбштейн-Барр.
    • Сыворотка пациентов, инфицированных другими видами спирохет (включая Treponema pallidum – сифилис) или страдающих аутоиммунными заболеваниями (включая ревматоидный артрит), может содержать антитела, имеющие перекрестную реакцию на некоторые антигены Borrelia Burgdorferi. В таком случае трактовка теста, приведенная выше, должна проводиться с определенными ограничениями.
    • Отрицательный результат теста не исключает возможности недавно перенесенной инфекции. Если у больного имеются клинические признаки заболевания, рекомендуется проведение теста на выявление IgM-антител. Если оба теста отрицательные, рекомендуется повторить тест через 10 – 14 дней для исключения замедленного иммунного ответа с выработкой антител.
     
Загрузка...

Поделиться этой страницей