Инновационные технологии для лабораторной диагностики и научных исследований
https://biochemmack.ru/catalog/element/13937/17187/
Назначение: набор recomBlot Borrelia IgG предназначен для качественного определения IgG-антител к Borrelia burgdorferi sensu stricto, B. garinii, B. afzelii в образцах человеческой сыворотки, плазмы или спинномозговой жидкости методом иммуноблота с целью подтверждения положительных или сомнительных результатов, полученных в скрининге. Анализируемые антигены: высокоочищенные рекомбинантные антигены Borrelia burgdorferi s. I. (OspA, OspC, p100, VlsE, p39, p58 p18 (= DbpA, декорин-связывающий белок A), p41 (флагеллин), p41i. Клиническая чувствительность: для Erythema migrans - 35.7%, для нейроборрелиоза – 73.7%, для артрита, ассоциированного с боррелиозной инфекцией 100%, акродерматита 100%. Клиническая специфичность: 94%. Приложения теста: бактерия Borrelia burgdorferi принадлежит семейству Spirochaetaceae и является этиологическим агентом болезни Лайма-боррелиоза. Этот патоген был впервые описан и охарактеризован W.Burgdorfer и A.Barbour в 1982 г. Он передается различными клещами рода Ixodes, в Европе это клещ Ixodes ricinus. Лайм-боррелиоз является одним из наиболее распространенных в мире заболеваний человека. В отличие от клещевого энцефалита он не ограничен несколькими эндемичными регионами. В Южной Германии, например, частота инфекции Borrelia burgdorferi, передаваемой Ixodes ricinus, колеблется между 10-15%. Лайм-боррелиоз был описан A. Steere в Соединенных Штатов в 1977 г. В Европе в ранних отчетах упоминалось о проявлениях боррелиоза: Afzelius в Швеции и Lipschutz в Австрии описали поражение кожи – мигрирующую эритему (erythema migrans, EM), которая ассоциирована с укусом клеща. Другое заболевание кожи - хронический атрофический акродерматит (ASA) был охарактеризован Herxheimer и Hartmann. Наконец, Garin и Bujadoux во Франции и Bannwarth описали неврологическую манифестацию боррелиоза. Лайм-боррелиоз имеет многочисленные клинические проявления, включая поражение кожи, скелетных мышц, неврологические симптомы, поражение лимфатической системы, сердца, воспалительные процессы в глазах, печени, легких и поражение почек и общие системные нарушения. Подобно сифилису Лайм-боррелиоз прогрессирует через различные клинические стадии. Steere выделил 3 стадии. Стадия 1: повреждение кожи EM, возникающее как экзантема в форме правильного круга на месте укуса клеща. Стадия 2: Поражение нервной системы (синдром Garin-Bujadoux-Bannwarth) и паралич (парез лица). Стадия 3: Характерным признаком этой стадии является Лайм-артрит. Asbrink модифицировал это разделение на раннюю инфекцию и позднюю инфекцию. Ранняя инфекция характеризуется локализованной EM, которая следует за диссеминированной инфекцией в течение нескольких дней или недель, если не начато лечение. Самые разные симптомы могут проявляться в течение недель или месяцев. Поздняя инфекция, которая диагностируется по Лайм-артриту или даже по ASA, наблюдается через год или несколько лет от момента первых проявлений заболевания. Конкретный пациент может иметь проявления только одной стадии или всех трех, также болезнь может быть асимптоматичной вплоть до стадий 2 и 3. Симптомы, общие для боррелиоза и других заболеваний, представляют собой большую диагностическую проблему. Тогда как в США патогеном, ассоциированным с болезнью Лайма, является почти исключительно геновид B. burgdorferi sensu stricto, в Европе описаны три вида, вызывающие болезнь Лайма: B. burgdorferi sensu stricto, B. Garinii и B. Afzelii. Дальнейшая классификация на серотипы, основанная на анализе с использованием моноклональных антител, выполнена проф. B.Wilske. Таким образом, лабораторная диагностика пациентов в Европе должна учитывать гетерогенность боррелиоза в диагностических тестах. Независимо от клинического диагноза, прямое культивирование Borrelia burgdorferi является надежнейшим подтверждением инфекции. Выявление патогена в биологических образцах пациента, таких как биоптаты кожи, образцы спинномозговой или синовиальной жидкости, очень рекомендуется, особенно на ранних стадиях инфекции. Культивирование образцов ткани кожи выявляет патоген в 50-70% случаев кожной манифестации болезни, но только всего в 3-5% случаев нейроборрелиоза. Кроме того, культивирование очень трудоемкая и длительная процедура, и может быть выполнена только в специализированных лабораториях. По этим причинам серологический анализ очень удобен для рутинных лабораторий. Используются следующие методы: тест непрямой иммунофлуоресценции с сывороткой, предварительно сорбированной Treponema phagedenis, тест непрямой гемагглютинации и иммуноферментный анализ. Если предполагается неврологическая манифестация заболевания, важным диагностическим критерием остается обнаружение интратекально продуцируемых антител (под оболочкой спинного мозга) в образцах спинномозговой жидкости. Результаты серологического анализа зависят от стадии болезни, длительности наблюдаемых симптомов и возможной предварительной антибиотикотерапии. По сравнению с методами, упомянутыми выше, иммуноблот имеет дополнительные критерии чувствительности и специфичности. Этим методом можно определять антитела классов IgG и IgM, и использовать его для подтверждения результатов, полученных другими методами: иммунофлуоресцентным и иммуноферментным. Использование для создания иммуноферментного набора разных штаммов Borrelia burgdorferi в качестве антигена может привести к вариабельным результатам анализа. Тесты, которые упоминались выше, часто нечувствительны на ранней стадии. Другой их проблемой являются перекрестные реакции с другими различными патогенами, особенно с Treponema pallidum – возбудителем сифилиса. Если антигены в аналитической системе в основном состоят из лизатов целого патогена, антитела против общих с другими патогенами антигенов тоже будут детектироваться. Имеется большой ряд белков с высоко консервативной среди видов аминокислотной последовательностью, например, белки теплового шока. Все эти ограничения можно избежать, используя антигены, полученные методами генной инженерии, как это сделано при создании данного набора. В отличие от лизатных блотов, в набор включены белки, экспрессируеые только in vivo, например, VlsE, и комбинация белков из различных геновидов боррелий. Кроме того, использование специфических белков сводит до минимума влияние перекрестно реагирующих антигенов. В отличие от блотов на основе рекомбинантных белков, многие важные антигены не представлены в лизатных блотах из клеток боррелий: p100, p39, p18 и VlsE. Это еще более важно для антигена OspC, который либо совсем не продуцируется штаммом Borrelia burgdorferi B31 (используемым для приготовления лизатов), либо в очень малых количествах. Также в лизатных блотах очень трудно дифференцировать значимые бэнды от так называемых общих антигенов, например, белков теплового шока. Антигены, используемые в recomBlot Borrelia дополнительно к белкам наружной мембраны боррелий OspA (31 кДа) и OspC (22 кДа), включают высоко специфичные антигены p100, VlsE, p39 и p18 (= DbpA, декорин-связывающий белок A), а также p41 (флагеллин) и специфическую внутреннюю часть антигена p41- p41i. OspC, p18 и VlsE представляют собой белки, синтезируемые только in vivo. В культуре они либо не синтезируются совсем, либо присутствуют в крайне небольших количествах, поэтому их получают рекомбинантным способом. В то же время гомологичные белки из разных геновидов могут быть представлены в одном тесте, это особенно касается двух разных штаммов геновидов B. Garini: штамм 20047 (OspA серотип A) и штамм T25 (OspA серотип 7), сконструированные как антиген OspC из B. Garini 1 и B. Garini 2. Выявление антител к OspC (22 кДа) в образцах пациентов с ранней стадией болезни Лайма (EM) свидетельствует о хорошей реактивности. Этот белок вместе с р41 является иммунодоминатным для IgM реактивности. OspC специфичнее р41 и может быть единственным иммунодоминантным маркером раннего иммунного ответа, антигены же p100, p39 и p18 особенно надежны для выявления позднего иммунного ответа. Продукция антител к VlsE в основном детектируется при IgG-ответе, часто раньше типичных IgG-маркеров, упомянутых выше.
24.01.2017