ПЦР

[Dzhala]

Пришел результат ПЦР из Хеликса - отрицательный
Кто-нибудь знает, насколько этот анализ вообще актуален при боррелиозе?
Я его сдавала на всякий случай, вместе с иммуноблотом, но он будет готов позже

 

[Dzhala]

вот нашла что-то:

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
В последние годы, для диагностики различных инфекционных заболеваний, стал широко использоваться метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР является очень чувствительным и теоретически позволяет установить присутствие нескольких единичных молекул ДНК или РНК микроорганизма в анализируемом биологическом образце.
При проведении ПЦР, в качестве мишеней используются различные геномные локусы боррелий. На сегодняшний день полностью известна структура генома одного штамма боррелий американского происхождения - B31 (Borrelia burgdorferi sensu stricto), который и является референс штаммом всей группы Borrelia burgdorferi. Однако генетическая структура одних и тех же генных локусов у различных геновидов боррелий отличается большой степенью их гетерогенности. Это обстоятельство накладывает определенные ограничения на выбор мишени для ПЦР, и, следовательно, на подбор праймеров такой структуры, которая бы гарантировала исключительную специфичность, не только в отношении всего комплекса B.burgdorferi.s.l., но и возможность их идентификации до геновида.
Метод ПЦР для диагностики боррелиоза в настоящее время не унифицирован. Для получения большей достоверности результатов ПЦР желательно использование нескольких диагностических ПЦР-систем. В клинической диагностике ЛБ использование метода ПЦР целесообразно по нескольким причинам.
Во-первых, метод ПЦР позволяет определять наличие ДНК боррелий в различном биологическом материале: клещ, кожный биоптат, кровь, моча, цереброспинальная и суставная жидкости и др. Высокая чувствительность этого метода позволяет определять инфицированность пациента на 7 - 14 день от момента присасывания клеща, часто еще в инкубационном периоде. Таким образом, реализуется возможность раннего лабораторного подтверждения диагноза боррелиоза.
Во-вторых, метод ПЦР позволяет идентифицировать возбудитель до геновида, осуществлять диагностику боррелиозных микст-инфекций, выявлять случаи повторных заражений, проводить контроль эффективности терапии по элиминации возбудителя и в отношении разных геновидов боррелий.
Оптимальным сроком контрольного исследования является 1 месяц после окончания лечения. За это время происходит полное выведение из организма человека ДНК и РНК боррелий в случае успешного лечения.

 

[Kristi]

вот нашла что-то:

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
В последние годы, для диагностики различных инфекционных заболеваний, стал широко использоваться метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР является очень чувствительным и теоретически позволяет установить присутствие нескольких единичных молекул ДНК или РНК микроорганизма в анализируемом биологическом образце.
При проведении ПЦР, в качестве мишеней используются различные геномные локусы боррелий. На сегодняшний день полностью известна структура генома одного штамма боррелий американского происхождения - B31 (Borrelia burgdorferi sensu stricto), который и является референс штаммом всей группы Borrelia burgdorferi. Однако генетическая структура одних и тех же генных локусов у различных геновидов боррелий отличается большой степенью их гетерогенности. Это обстоятельство накладывает определенные ограничения на выбор мишени для ПЦР, и, следовательно, на подбор праймеров такой структуры, которая бы гарантировала исключительную специфичность, не только в отношении всего комплекса B.burgdorferi.s.l., но и возможность их идентификации до геновида.
Метод ПЦР для диагностики боррелиоза в настоящее время не унифицирован. Для получения большей достоверности результатов ПЦР желательно использование нескольких диагностических ПЦР-систем. В клинической диагностике ЛБ использование метода ПЦР целесообразно по нескольким причинам.
Во-первых, метод ПЦР позволяет определять наличие ДНК боррелий в различном биологическом материале: клещ, кожный биоптат, кровь, моча, цереброспинальная и суставная жидкости и др. Высокая чувствительность этого метода позволяет определять инфицированность пациента на 7 - 14 день от момента присасывания клеща, часто еще в инкубационном периоде. Таким образом, реализуется возможность раннего лабораторного подтверждения диагноза боррелиоза.
Во-вторых, метод ПЦР позволяет идентифицировать возбудитель до геновида, осуществлять диагностику боррелиозных микст-инфекций, выявлять случаи повторных заражений, проводить контроль эффективности терапии по элиминации возбудителя и в отношении разных геновидов боррелий.
Оптимальным сроком контрольного исследования является 1 месяц после окончания лечения. За это время происходит полное выведение из организма человека ДНК и РНК боррелий в случае успешного лечения.

Джала, спасибо, что в очередной раз знакомите нас с новой информацией. Я почитала про этот анализ, по идее он должен быть очень точным, т.к. настроен на выявление не реакции нашего иммунитета (антител), а отрезков днк возбудителя т.е. в нашем случае боррелии б. А ведь точнее, чем анализы днк еще ничего нет. Кто-нибудь знает, почему данный анализ не используется широк для выявления боррелиоза? есть ли какие-то ограничения?

 

[Лама]

Вот что написано про ПЦР в Инвитро.

Специфические антитела к возбудителю боррелиоза (болезни Лайма, Lyme Disease), свидетельствующие о текущей или перенесённой в прошлом инфекции.
Боррелиоз или болезнь Лайма (по названию местечка, в котором в 1975 г. было впервые выявлено заболевание) – распространённая, переносимая клещами инфекция. Возбудитель – очень маленькая спирохета Borrelia burgdorferi, единственная из всех боррелий патогенная для человека. Хозяевами являются многие позвоночные животные: собаки, овцы, птицы, коровы и лошади, но основной хозяин и переносчик – иксодовые клещи, у которых инфекция длится на протяжении всей жизни клеща. В России - это I.ricinus и I.persulcatus. Заболевание характерно для весенне-летнего периода. Чаще наблюдается в Московской, Ленинградской, Тверской и других, преимущественно северных областях, а также в Прибалтике.
Заболевание системное, имеющее 3 стадии

• I стадия возникает через одну неделю после укуса клеща и длится от 3 до 33 дней. Для неё характерна лихорадка и мигрирующая эритема. Если терапию начинают в этой стадии, то дальнейшее развитие заболевание удаётся предотвратить.
• Через 4 недели после укуса развивается II стадия. Для неё характерны поражение сердца и неврологическая «триада»: асептический менингит, паралич лицевого нерва и периферические невропатии.
• Через 6 недель, а иногда через несколько лет у нелеченных больных развиваются тяжёлые поражения суставов.

Лабораторная диагностика. При классической картине мигрирующей эритемы диагноз ставится по клиническим признакам, в остальных случаях его подтверждают лабораторными методами. Посев, выявление антигена возбудителя и гистологическое исследование кожи недостаточно чувствительны и специфичны, гистологическое исследование, кроме того, инвазивно. Поэтому диагноз подтверждают, в основном, серологическими методами - выявлением в крови специфических IgG и IgM антител к возбудителю (в лаборатории ИНВИТРО, соответственно, тесты № 243 и № 244).
ПЦР-тестирование на наличие генетического материала возбудителя в данном случае малоэффективно, но используется при необходимости у пациентов с отрицательными результатами серологических тестов, но вескими клиническими подозрениями на инфицирование, а также у пациентов с иммунодефицитом.
Антитела класса IgG к Borrelia burgdorferi могут выявляться на 1 - 3 неделях после инфицирования, вслед за антителами класса IgM, максимальное количество IgG синтезируется через 1,5 - 3 месяца после инфицирования. Антитела к Borrelia burgdorferi часто не выявляются на ранней, локализованной стадии заболевания или при рано назначенной антимикробной терапии.
Таким образом, отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях инфекции не является подтверждением её отсутствия и требует перепроверки в динамике через 2 - 4 недели. На диссеминированной и хронической стадиях специфические антитела к возбудителю имеются практически всегда. Антитела класса IgG циркулируют в крови длительный срок (от нескольких месяцев до нескольких лет), даже после успешной антимикробной терапии и излечения инфекции. Поэтому по присутствию и титру антител об успехе лечения судить нельзя. Иммунитет против Borrelia burgdorferi не является стерильным. У переболевших людей возможно повторное заражение через несколько лет. Выявление антител к Borrelia burgdorferi не всегда сопровождается клиническими признаками болезни Лайма.
По оценкам, специфичность ИФА тестирования антител к Borrelia burgdorferi в настоящее время достигает 95% (т. е. неспецифические реакции, перекрёстное реагирование с антигенами других бактерий могут примерно в 5% случаев давать ложноположительные результаты).
В сомнительных случаях для подтверждения результатов ИФА-тестов используют иммуноблот.

 

[levis.505]

Джала, спасибо, что в очередной раз знакомите нас с новой информацией. Я почитала про этот анализ, по идее он должен быть очень точным, т.к. настроен на выявление не реакции нашего иммунитета (антител), а отрезков днк возбудителя т.е. в нашем случае боррелии б. А ведь точнее, чем анализы днк еще ничего нет. Кто-нибудь знает, почему данный анализ не используется широк для выявления боррелиоза? есть ли какие-то ограничения?

Кристи. Да, ПЦР на самом деле является очень точным так как, прямо, не увязан с АТ, а значит и с самим иммуннитетом( с возможными иммунными капризами). Но, применительно именно к анализу крови, есть но! Боррелии находятся в кровотоке считанные часы, поэтому оставляют очень короткий ДНК, РНК след. Предполагаю, что поймать этот след представляется, достаточно сложной задачей. Касательно других материалов для исследования, где боррелии находились(или находятся) более долгое время, ПЦР очень точен, да пожалуй и единственный, выявляющий именно ДНК,РНК. Радует утверждение: что при излечении, через месяц- ОТРИЦАТЕЛЬНО.

 

[levis.505]

Лама. В Инвитро пишут все правильно, что современные ИФА имеют высокую точность. Но я смотрел их сайт, относительно АТ к боррелиям, увидел только Хемилюнисцентный(продвинутый нРИФ)-менее точный. Может я где то не там смотрел. Но мне кажется, что во всех лаб. они предлагают одно и тоже.

 

[Лама]

Я, честно говоря, не пойму еще про ПЦР вообще...

 

[Tatia]

Но, применительно именно к анализу крови, есть но! Боррелии находятся в кровотоке считанные часы, поэтому оставляют очень короткий ДНК, РНК след. Предполагаю, что поймать этот след представляется, достаточно сложной задачей.

Недавно опять нашла подтверждение, что боррелии в эритемах есть (в медицинской публикации), вопреки Ускову. Речь шла о ПЦР на боррелии, по ходу исследования у больных с эритемами брали биоптаты кожи и находили там следы боррелий методом ПЦР как-раз. Поэтому больной МЭ в стадии мокнутия может быть заразен для окружающих. Последнее утверждение (про заразность) уже мое, а не из публикации, вот так мне кажется.

 

[Klever]

Недавно опять нашла подтверждение, что боррелии в эритемах есть (в медицинской публикации), вопреки Ускову. Речь шла о ПЦР на боррелии, по ходу исследования у больных с эритемами брали биоптаты кожи и находили там следы боррелий методом ПЦР как-раз. Поэтому больной МЭ в стадии мокнутия может быть заразен для окружающих. Последнее утверждение (про заразность) уже мое, а не из публикации, вот так мне кажется.

Добрый день! Интересная информация, а не подскажете где можно посмотреть эти исследования?

 

[Tatia]

Добрый день! Интересная информация, а не подскажете где можно посмотреть эти исследования?

я много "серфю" на работе и не сохраняю ссылки, к сожалению, если повторно набреду, то выложу.

 

[Klever]

я много "серфю" на работе и не сохраняю ссылки, к сожалению, если повторно набреду, то выложу.

Спасибо, надеюсь, что набредете

 

[levis.505]

Недавно опять нашла подтверждение, что боррелии в эритемах есть (в медицинской публикации), вопреки Ускову. Речь шла о ПЦР на боррелии, по ходу исследования у больных с эритемами брали биоптаты кожи и находили там следы боррелий методом ПЦР как-раз. Поэтому больной МЭ в стадии мокнутия может быть заразен для окружающих. Последнее утверждение (про заразность) уже мое, а не из публикации, вот так мне кажется.

Татя. Мне тоже такая инфо. попадалась. Но, лично мне все же кажется, что боррельки точно знают куда им надо:клещь-кровоток-где по вкусней(3 известные нам системы),и в промежутках , если задерживаются, то крайне не долго. Не секрет что увеличивается число безэритемных больных,и мне вот что вообще кажется: что клещей, образно, можно поделить на чистых и грязных. Чистые-безэритемно, грязные-эритема и всякие бабезии, ирлихии и еще какя нибудь клещевая хрень. А если ПЦР дал положительный результат, это однозначно не говорит о присутствии самих боррелий, а не ДНК,РНК хвоста. Так что думаю, если потерется об эритему, врятли можно заразится.

 

[Kristi]

Так что думаю, если потерется об эритему, врятли можно заразится.

Согласна с Левисом, еще мне кажется, что боррелии должны передаваться с органическим жидкостями, отсюда вопрос? может ли это заболевание передаваться половым путем (мне правда в такую возможность совершенно не верится, но это эмоции) ?

 

[levis.505]

Согласна с Левисом, еще мне кажется, что боррелии должны передаваться с органическим жидкостями, отсюда вопрос? может ли это заболевание передаваться половым путем (мне правда в такую возможность совершенно не верится, но это эмоции) ?

Кристи. Согласен с Вами, только при наличии питательной по их мнению, био среды(если бы они умели скакать как кузнечики, это была бы совсем катастрофа). Половым, нет конечно, наши слизистые оболочки им пришлись не по вкусу(хоть на этом им спасибо). Если было бы иначе, нас тестировали бы, в обязательном порядке, как RW(где подруге боррелии Трепонеме, некоторые наши слизистые пришлись очень даже по вкусу).

 

[Лама]

Кристи. Согласен с Вами, только при наличии питательной по их мнению, био среды(если бы они умели скакать как кузнечики, это была бы совсем катастрофа). Половым, нет конечно, наши слизистые оболочки им пришлись не по вкусу(хоть на этом им спасибо). Если было бы иначе, нас тестировали бы, в обязательном порядке, как RW(где подруге боррелии Трепонеме, некоторые наши слизистые пришлись очень даже по вкусу).

И еще, мне кажется, нас бы точно лечили на любой стадии, если б мы были заразны, тогда и социально опасны

 

[Лама]

Я так понима, ПЦР не всегда положительный, потому что не все геновиды боррелий известны или, как это выразится, есть для проведения данного анализа. вот нашла, что обнаружен новый штамм боррелий «Т6/Р51», относится к порядку Spirochaetales семейству Spirochaetaceae роду Borrelia генокомплексу Borrelia burgdorferi sensu lato генотипу Borrelia garinii NT 29. А в ссылке у Джалы написано: " На сегодняшний день полностью известна структура генома одного штамма боррелий американского происхождения - B31 (Borrelia burgdorferi sensu stricto), который и является референс штаммом всей группы Borrelia burgdorferi. Однако генетическая структура одних и тех же генных локусов у различных геновидов боррелий отличается большой степенью их гетерогенности. Это обстоятельство накладывает определенные ограничения на выбор мишени для ПЦР , и, следовательно, на подбор праймеров такой структуры, которая бы гарантировала исключительную специфичность, не только в отношении всего комплекса B.burgdorferi.s.l., но и возможность их идентификации до геновида."
Короче, нет ДНК все видов, поэтому может быть и отрицательный показатель. Я уже ищу тут везде, какой же самый лучший анализ, который может показать правильность лечения, ну пипец...ничего нет((((((

 

[irina009]

Здравствуйте! Хоть вопросы были заданы давно, но хотелось бы узнать, вы выяснили какие лучше анализы определяют наличие Borrelia?

 

[Niko]

Это на самом деле очень не простой вопрос так как абсолютно все имеющиеся на данный момент анализы не идеальны.
В зависемости от ситуации в каждом случае свои вариант.
Базово диагностика выглядит следующим образом

1.Elisa IgG IgM и иммуноблот IgG IgM (эти тесты все отличаются по качеству в зависемости от фирмы производителя и могут быть не чуствительны в ряде случаев)

2.Если у человека эритема или другие кожные проявляния,лимфоцитома, воспалены лимфотические узлы, или проблемы в суставе может быть полезен ПЦР.

3. В случае долгой хрони или нейропсихической манифестации смотрять спино мозговую жидкость на предмет плейоцитоза,интратекальные антитела и еще cxcl13 воспалительный цитокин своиственный боррелиозу. Ну и пцр можно за одно сделать но это больше на удачу.

4. В случае отрицательных всех предыдущих анализов есть косвенные анализы типа Cd57 и ltt ну и разные исследования мочи эти анализы имеют не очень высокий уровень доказаности по этому их оценивают в комплексе с симптомами.

5. Есть еще культивирование, но оно только в америке дорогое и длинное исследование.

И при всех этих тестах человек может иметь боррелиоз но они могут быть отрицательны. В основном вся диагностика классической медицины идет по первому пункту и на западе по третьему 3. В случае иладс по 4 и 1.
И то и то не фига не доставерно.

Так как разновидностей боррелии много нету не одного теста который ловит все варианты. Возможны варианты когда в одной лабе все отрицательно в другой положительно, есть кросс реакции с другими инфекциями и аутоиммуными заболеваниями, ну и есть просто лимиты тест систем (нету стандарта).

В основном диагноз ставят в совокупности анализов, клинической картины и функциональных обследований. Так что в каждом случае все индивидуально.

Если вы хотите для себя определиться то вам наверно лучше написать свою историю. А так обычно все начинается с 1 пункта какой лучший вариант доступен у вас в стране я не знаю)