Vatrushka
Модератор
- Сообщения
- 8.745
- Лайки
- 7.223
- Баллы
- 128
Лабораторная диагностика малярии и бабезиозов. Методические указания 2014 г.
Диагностика возбудителей бабезиозов вводится в целях дифференциальной диагностики с возбудителями малярии, в частности, с P. falciparum. Поскольку, несмотря на различия в жизненном цикле возбудителей малярии и бабезиозов, они имеют ряд близких особенностей по морфологии некоторых стадий развития возбудителей в эритроцитах и по клиническим проявлениям инфекции.
Для обнаружения эритроцитарных форм плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом тонкого мазка и толстой капли, окрашенные по методу Романовского–Гимзы. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.
Основной метод – толстая капля. В толстой капле форменные элементы располагаются многослойно. В результате за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30—40 раз большее, чем в тонком мазке, что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Чувствительность метода толстой капли такова, что при просмотре 100 полей зрения можно обнаружить паразитов при их численности около 8 в 1 мкл
крови. Начинать надо всегда с просмотра толстой капли.
Толстую каплю окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов, в результате чего паразиты становятся доступными для выявления. Однако при этом паразиты подвергаются деформации. Толстая капля может позволить выявить и других паразитов крови: бабезий, трипаносом, микрофилярий, спирохет. В тонком мазке, фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности, присущие данному виду паразита, и характерные изменения пораженного эритроцита. Тонкий мазок крови делают в дополнение к толстой капле.
Основным методом диагностики бабезиозов является микроскопическое исследование препаратов крови – толстой капли и тонкого мазка. Однако при диагностике инфекции B. microti, характеризующейся низкой или субмикроскопической паразитемией, одна микроскопия при отрицательном результате может
создать ложное представление, поэтому применяют и другие методы. Проводится иммунологическое исследование для обнаружения специфических антител с применением иммунофлюоресцентной методики (РИФ), а также молекулярно-биологическим методом – полимеразной цепной реакцией (ПЦР), позволяющей выявить единичные особи паразита. Для выявления низкой и субмикроскопической паразитемии проводится заражение хомяков кровью больного – изодиагностика; заболевание хомяков наступает спустя 1—4 недели.
5.10. Морфологические признаки возбудителей бабезиозов
Бабезиозы – группа инфекций млекопитающих, передающихся клещами, крайне редко поражающие человека. Как и плазмодии, бабезии относятся к типу Apicomplexa.
После укуса человека заражённым клещом спорозоиты внедряются в эритроциты, в большей степени циркулирующие в мелких глубоких сосудах внутренних органов в сравнении с периферическими сосудами. Начинается развитие в эритроцитах бабезий разных возрастных стадий и последующих стадий бинарного деления. Паразитемия характеризуется морфологическим полиморфизмом, наиболее чётко выявляемым в тонком мазке крови, чем в толстой капле крови, окрашенных по Романовскому–Гимзе. Наряду с мелкими кольцевидными стадиями,
напоминающими кольца P. falciparum, и мерозоитами, имеющими некоторое сходство с мерозоитами малярийных паразитов, появляются грушевидные (булавовидные) формы, нехарактерные для каких-либо других видов кровепаразитов.
Грушевидные формы составляют преобладающую часть паразитов. Термин «грушевидность» связан с характером ядра бабезий, особенности которого- не резко выраженный переход от округлой формы к вытянутой – начинает проявляться уже на стадии мерозоита. На последующих стадиях развития бабезий ядро постепенно приобретает овальную форму. На стадии бинарного деления ядро имеет характерную грушевидную (булавовидную) форму за счёт появляющихся двусторонних вдавлений.
На основании особенностей морфологии бабезии могут быть разделены на две основные группы.
Развивающиеся формы. Мерозоиты – ядро иногда несколько вытянутое, прилегающее одним из полюсов к небольшому участку цитоплазмы. Кольцевидные формы с одинарным или двойным ядром и окружающим вакуоль нежным, иногда двойным ободком цитоплазмы. Ланцетовидные формы – переходные к делящимся грушевидным: округлые или овальные, с вакуолью и более выраженным оваловидным ядром в сравнении с мерозоитом.
Формы бинарного деления. В зависимости от характера сочетаний ядра и цитоплазмы появляются разные конфигурации грушевидных форм, включая перпендикулярное объединение двух парных грушевидных форм – тетрада, так называемый «мальтийский крест»; разделившаяся грушевидная форма – два ядра, лежащие по отдельности, без признаков цитоплазмы – предшественники мерозоитов.
Поражённые эритроциты не изменены ни по форме, ни по окраске. Паразиты расположены в эритроците как по краю, так и в разных его участках. Нередки заражения одного эритроцита несколькими особями бабезий. Какие-либо включения, напоминающие пигмент малярийных паразитов, не выявляются независимо от стадии развития бабезий в эритроците.
Бабезии более мелкие, чем другие виды кровепаразиты. У B. divergens, в среднем, округлые формы (мерозоиты и ланцетовидные) – 1,5 мкм, грушевидные –1,5—2,0 мкм × 0,75 мкм.
У B. microti – при остром течении празитемия нарастает значительно медленнее и не достигает уровня, характерного для B. divergens и B. bovis. Характер паразитемии практически не отличается от B. divergens.
У бабезий, как и у других кровепаразитов, при окраске по Романовскому–Гимзе ядро окрашено в красный цвет, иногда с фиолетовым оттенком, цитоплазма – в голубой цвет, иногда с синеватым оттенком, однако окраска более нежная.
Наиболее полное представление о характере паразитемии может быть получено при заражении B. divergens. Злокачественное развитие инфекции, обусловливающее быстрое нарастание численности паразитов с первых дней клинических проявлений, позволяет выявить разные морфологические формы бабезий и другие особенности паразитемии.
Дифференциальный диагноз между возбудителями бабезиозов с возбудителем тропической малярии
Необходимо обратить внимание на следующие особенности:
– наличие в препаратах крови толстая капля и тонкий мазок грушевидных
форм паразита, не характерных для P. falciparum;
– отсутствие у бабезий пигмента, характерного для малярийных паразитов;
– отсутствие лейкоцитов-пигментофагов, которые в случае заражения
P. falciparum при интенсивной паразитемии появлялись бы в периферической
крови;
– отсутствие стадий паразита, размножающихся шизогонией.
Необходимо также учитывать эпизоотологическую ситуацию – распространенность бабезиоза среди крупного рогатого скота и высокую численность клещей-переносчиков рода Ixodes на территории, где был зарегистрирован бабезиоз человека.
Развивающиеся и грушевидные формы,
пораженные эритроциты (картинки) на стр 33
Диагностика возбудителей бабезиозов вводится в целях дифференциальной диагностики с возбудителями малярии, в частности, с P. falciparum. Поскольку, несмотря на различия в жизненном цикле возбудителей малярии и бабезиозов, они имеют ряд близких особенностей по морфологии некоторых стадий развития возбудителей в эритроцитах и по клиническим проявлениям инфекции.
Для обнаружения эритроцитарных форм плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом тонкого мазка и толстой капли, окрашенные по методу Романовского–Гимзы. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.
Основной метод – толстая капля. В толстой капле форменные элементы располагаются многослойно. В результате за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30—40 раз большее, чем в тонком мазке, что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Чувствительность метода толстой капли такова, что при просмотре 100 полей зрения можно обнаружить паразитов при их численности около 8 в 1 мкл
крови. Начинать надо всегда с просмотра толстой капли.
Толстую каплю окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов, в результате чего паразиты становятся доступными для выявления. Однако при этом паразиты подвергаются деформации. Толстая капля может позволить выявить и других паразитов крови: бабезий, трипаносом, микрофилярий, спирохет. В тонком мазке, фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности, присущие данному виду паразита, и характерные изменения пораженного эритроцита. Тонкий мазок крови делают в дополнение к толстой капле.
Основным методом диагностики бабезиозов является микроскопическое исследование препаратов крови – толстой капли и тонкого мазка. Однако при диагностике инфекции B. microti, характеризующейся низкой или субмикроскопической паразитемией, одна микроскопия при отрицательном результате может
создать ложное представление, поэтому применяют и другие методы. Проводится иммунологическое исследование для обнаружения специфических антител с применением иммунофлюоресцентной методики (РИФ), а также молекулярно-биологическим методом – полимеразной цепной реакцией (ПЦР), позволяющей выявить единичные особи паразита. Для выявления низкой и субмикроскопической паразитемии проводится заражение хомяков кровью больного – изодиагностика; заболевание хомяков наступает спустя 1—4 недели.
5.10. Морфологические признаки возбудителей бабезиозов
Бабезиозы – группа инфекций млекопитающих, передающихся клещами, крайне редко поражающие человека. Как и плазмодии, бабезии относятся к типу Apicomplexa.
После укуса человека заражённым клещом спорозоиты внедряются в эритроциты, в большей степени циркулирующие в мелких глубоких сосудах внутренних органов в сравнении с периферическими сосудами. Начинается развитие в эритроцитах бабезий разных возрастных стадий и последующих стадий бинарного деления. Паразитемия характеризуется морфологическим полиморфизмом, наиболее чётко выявляемым в тонком мазке крови, чем в толстой капле крови, окрашенных по Романовскому–Гимзе. Наряду с мелкими кольцевидными стадиями,
напоминающими кольца P. falciparum, и мерозоитами, имеющими некоторое сходство с мерозоитами малярийных паразитов, появляются грушевидные (булавовидные) формы, нехарактерные для каких-либо других видов кровепаразитов.
Грушевидные формы составляют преобладающую часть паразитов. Термин «грушевидность» связан с характером ядра бабезий, особенности которого- не резко выраженный переход от округлой формы к вытянутой – начинает проявляться уже на стадии мерозоита. На последующих стадиях развития бабезий ядро постепенно приобретает овальную форму. На стадии бинарного деления ядро имеет характерную грушевидную (булавовидную) форму за счёт появляющихся двусторонних вдавлений.
На основании особенностей морфологии бабезии могут быть разделены на две основные группы.
Развивающиеся формы. Мерозоиты – ядро иногда несколько вытянутое, прилегающее одним из полюсов к небольшому участку цитоплазмы. Кольцевидные формы с одинарным или двойным ядром и окружающим вакуоль нежным, иногда двойным ободком цитоплазмы. Ланцетовидные формы – переходные к делящимся грушевидным: округлые или овальные, с вакуолью и более выраженным оваловидным ядром в сравнении с мерозоитом.
Формы бинарного деления. В зависимости от характера сочетаний ядра и цитоплазмы появляются разные конфигурации грушевидных форм, включая перпендикулярное объединение двух парных грушевидных форм – тетрада, так называемый «мальтийский крест»; разделившаяся грушевидная форма – два ядра, лежащие по отдельности, без признаков цитоплазмы – предшественники мерозоитов.
Поражённые эритроциты не изменены ни по форме, ни по окраске. Паразиты расположены в эритроците как по краю, так и в разных его участках. Нередки заражения одного эритроцита несколькими особями бабезий. Какие-либо включения, напоминающие пигмент малярийных паразитов, не выявляются независимо от стадии развития бабезий в эритроците.
Бабезии более мелкие, чем другие виды кровепаразиты. У B. divergens, в среднем, округлые формы (мерозоиты и ланцетовидные) – 1,5 мкм, грушевидные –1,5—2,0 мкм × 0,75 мкм.
У B. microti – при остром течении празитемия нарастает значительно медленнее и не достигает уровня, характерного для B. divergens и B. bovis. Характер паразитемии практически не отличается от B. divergens.
У бабезий, как и у других кровепаразитов, при окраске по Романовскому–Гимзе ядро окрашено в красный цвет, иногда с фиолетовым оттенком, цитоплазма – в голубой цвет, иногда с синеватым оттенком, однако окраска более нежная.
Наиболее полное представление о характере паразитемии может быть получено при заражении B. divergens. Злокачественное развитие инфекции, обусловливающее быстрое нарастание численности паразитов с первых дней клинических проявлений, позволяет выявить разные морфологические формы бабезий и другие особенности паразитемии.
Дифференциальный диагноз между возбудителями бабезиозов с возбудителем тропической малярии
Необходимо обратить внимание на следующие особенности:
– наличие в препаратах крови толстая капля и тонкий мазок грушевидных
форм паразита, не характерных для P. falciparum;
– отсутствие у бабезий пигмента, характерного для малярийных паразитов;
– отсутствие лейкоцитов-пигментофагов, которые в случае заражения
P. falciparum при интенсивной паразитемии появлялись бы в периферической
крови;
– отсутствие стадий паразита, размножающихся шизогонией.
Необходимо также учитывать эпизоотологическую ситуацию – распространенность бабезиоза среди крупного рогатого скота и высокую численность клещей-переносчиков рода Ixodes на территории, где был зарегистрирован бабезиоз человека.
Развивающиеся и грушевидные формы,
пораженные эритроциты (картинки) на стр 33
. Наверное, потому как анализ не популярный, подзабытый, ведь малярии у нас в стране не густо.
