Биопленки / Биооболочки

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
Я начинаю тему о биопленках, потому что она, кажется, назрела дальше некуда. К сожалению, у меня нет возможности собрать весь материал в одном сообщении, поэтому я буду делать это постепенно. Пожалуйста, не комментируйте в этой теме, потому что постепенно материала в ней будет много. Для комментариев и обсуждения можно создать тему в разделе обсуждений. Ну и, конечно, каждый может выкладывать свои находки по данной теме.

Самой серьезной проблемой в лечении хронических инфекций является создание бактериями жизненного пространства, заключенных в биооболочки, где они становятся недосягаемыми для подавляющего большинства антимикробных средств. Бактерии создают свои "государства", где они живут и размножаются, но при благоприятной среде выходят в огранизм и начинается новый виток заболевания.

Article:
Что такое биопленка?

В статье представлены данные литературы о биопленке — особой форме организации микрофлоры организма человека, роли микробных биопленок в возникновении и развитии многих распространенных заболеваний, причинах антибиотикорезистентности при их лечении.

Вплоть до конца прошлого века микробиология развивалась главным образом на основе исследований чистых культур микроорганизмов. В конце ХХ века сформировалось представление об особой форме организации микрофлоры организма человека — хорошо организованном взаимодействующем сообществе микроорганизмов, покрывающих поверхности кишечной стенки, других слизистых оболочек, кожи и зубов человека. На сегодняшний день известно, что большинство бактерий существуют в природе не в виде свободно плавающих клеток, а в виде специфически организованных биопленок (Biofilms). Причем сами бактерии составляют лишь 5-35% массы биопленки, остальная часть — это межбактериальный матрикс. Такая форма существования предоставляет бактериям массу преимуществ в условиях воздействия неблагоприятных факторов внешней среды и организма-хозяина. Микрофлора биопленки более устойчива к воздействию неблагоприятных факторов физической, химической и биологической природы по сравнению со свободно плавающими бактериями — они оказались очень устойчивы к воздействию ультрафиолетового излучения, дегидратации и вирусам, антибиотикам и факторам иммунной защиты [1, 3]. Фактором устойчивости биопленок оказывается слизисто-полимерный слой, вырабатываемый сразу после адгезии, и включающий липополисахариды, протеогликаны, гликопротеиды, эндополисахариды, аналогичные веществу клеточной стенки, гликокаликса и капсул бактерий. Примером защитной функции полимерной пленки является выживание Salmonella при хлорировании, что доказывает устойчивость биопленки к данному способу дезинфекции.

В природе биопленки распространены повсеместно. Формирование биопленок отмечено у большинства бактерий в природных, клинических и промышленных условиях. Они образуются в условиях текучести на границе двух средовых фаз (жидкость — жидкость, жидкость — воздух и т.д.). Биопленки обнаруживаются на твердых субстратах, погруженных в водный раствор, а также могут создавать плавающие маты на жидких поверхностях. Классическим примером биопленки может служить тонкое наслоение на скалах, находящихся посреди течения. При достаточных ресурсах для роста биопленки быстро растут до макроскопических размеров. В биопленках может содержаться множество различных видов микроорганизмов, например, бактерии, простейшие, грибы и водоросли, каждый из группы выполняет специализированные метаболические функции [2, 4, 5]. Watnick P. и Kolter R. справедливо называют биопленки городами микробов [1].

Современная биотехнология позволяет успешно использовать оптимальное сообщество микроорганизмов для выполнения определенных функций. Это актуально в производстве пищевых продуктов, лекарств и пищевых добавок, утилизации разного рода отходов, нейтрализации загрязнений воды и почвы нефтепродуктами. Такие сообщества называют иногда консорциумами микроорганизмов. Практика показала многократное увеличение эффективности работы микроорганизмов при такой организации.

Биопленка — сообщество микробов, которые прикреплены к поверхности или друг к другу, заключены в матрикс синтезированных ими внеклеточных полимерных веществ, имеют измененный фенотип, проявляющийся другими параметрами роста и экспрессии специфичных генов [6]. Это определение позволяет отличить микробные сообщества биопленок от похожих на них лишь внешне структур, например, колонии бактерий, растущих на поверхности агара, которые не проявляют ни одной из характеристик, свойственных истинной биопленке. Важно отметить, что бактерии, включенные в матрикс фрагментов, которые отрываются от биопленок на колонизированном медицинском устройстве и циркулируют в жидкостях тела, устойчиво проявляют все фенотипические характеристики исходной биопленки.

Выделяют пять стадий развития биопленки (рис.1):

1. Сначала происходит первичное прикрепление микроорганизмов к поверхности (адгезия, сорбция) из окружающей среды (обычно жидкости). Эта стадия обратима.

2. Окончательное (необратимое) прикрепление, иначе называемое фиксацией. На этой стадии микробы выделяют внеклеточные полимеры, обеспечивающие прочную адгезию.

3. Созревание (в англоязычной литературе — созревание-I). Клетки, прикрепившиеся к поверхности, облегчают прикрепление последующих клеток, внеклеточный матрикс удерживает вместе всю колонию. Накапливаются питательные вещества, клетки начинают делиться.

4. Рост (в англоязычной литературе — созревание-II). Образована зрелая биопленка, и теперь она изменяет свой размер и форму. Внеклеточный матрикс служит защитой клеток от внешних угроз.

5. Дисперсия (выброс бактерий): в результате деления периодически от биопленки отрываются отдельные клетки, способные через некоторое время прикрепиться к поверхности и образовать новую колонию.

Рисунок 1. Стадии развития биопленки (копия из Wikipedia)

Стадии развития биопленки
08.12.png

Основные свойства биопленки:
— взаимодействующая общность разных типов микроорганизмов;
— микроорганизмы собраны в микроколонии;
— микроколонии окружены защитным матриксом;
— внутри микроколоний — различная среда;
— микроорганизмы имеют примитивную систему связи;
— микроорганизмы в биопленке устойчивы к антибиотикам, антимикробным средствам и реакции организма хозяина.

К настоящему времени достоверно доказана роль микробных биопленок в возникновении и развитии таких распространенных заболеваний, как инфекции, связанные с катетеризацией сосудов, вызванные Staphylococcus aureus и другими грамположительными микроорганизмами; инфекции сердечных клапанов и суставных протезов, вызываемые стафилококками; пародонтит, обусловленный рядом микроорганизмов полости рта; инфекции мочевых путей, определяемые Е. coli и др. патогенами; инфекции среднего уха — причина, например, Haemophilus influenzae, муковисцидоз, вызываемый P. Aeruginosa и др.

Все эти заболевания трудны для лечения, имеют высокую частоту рецидивов и некоторые из них могут явиться причиной летальных исходов. Далеко не до конца ясны механизмы, по которым микроорганизмы, образующие биопленки, вызывают патологические процессы в макроорганизме.

Кроме тканей организма хозяина, микробные биопленки колонизируют различные медицинские устройства небиологической природы, внедряемые в организм человека (катетеры, водители ритма, сердечные клапаны, ортопедические устройства). Исследования имплантированных медицинских устройств с применением электронной микроскопии показали присутствие бактериальных биопленок.

Важно учитывать при подозрении на формирование биопленки у пациента:

1. отслоение биопленок в кровотоке или мочевыводящем тракте может приводить к формированию эмболов;

2. бактерии в биопленках могут обмениваться плазмидами резистентности (передача резистентности от вида к виду);

3. биопленки могут снижать чувствительность бактерий к антимикробным агентам

4. биопленки с гр. отриц. бактериями могут продуцировать эндотоксин, что может приводить к инфекционно-токсическому шоку;

5. бактерии в биопленке не поддаются воздействию иммунной системы хозяина.

Многочисленные физиологические процессы, происходящие в биопленке, отличаются от физиологии чистых культур этих же бактерий. Соответственно, реакция микроорганизмов на изменение условий окружающей среды в биопленке существенно отличается от реакции каждого отдельного вида в монокультуре. Такая организация обеспечивает ее физиологическую и функциональную стабильность и является основой конкурентного выживания в экологической нише. Сообщество микроорганизмов организует единую генетическую систему в виде плазмид — кольцевых ДНК, несущих поведенческий код для членов биопленки, определяющих их пищевые (трофические), энергетические и другие связи между собой и внешним миром [2]. Последнее получило специальное определение как социальное поведение микроорганизмов — Qvorum sensis [1, 5].

Феномен коллективного поведения бактерий впервые был описан около 20 лет назад, однако функции и роль системы Qvorum sensis, которая обеспечивает социальное поведение бактерий, до сих пор остаются малоизученными и являются предметом крайне перспективного для медицинской практики научного поиска. В организме человека преимущество такой организации заключается в обеспечении гомеостаза органов, функциональность которых зависит от населяющих их микробов.

По современным представлениям, основу нормальной микрофлоры человека составляют облигатные анаэробные бактерии, количество которых достигает 1013-1014, что на 1-2 порядка превышает количество эукариотических клеток всех тканей и органов человека вместе взятых [3, 21]. Исследования последних лет показали, что представители нормальной микрофлоры присутствуют в организме человека в виде фиксированных к определенным рецепторам микроколоний, заключенных в биопленку, которая как перчатка, покрывает кожу и слизистые оболочки. Биопленка состоит из экзополисахаридов микробного происхождения, микроколоний и муцина [2]. Функционально биопленка напоминает плаценту. Если плацента регулирует взаимоотношения плода и организма матери, то биопленка выполняет схожую роль, регулируя взаимоотношения между макроорганизмом и окружающей средой. Кроме того, микроорганизмы, входящие в состав биопленок, осуществляют многочисленные метаболические реакции, вовлекаясь в процессы синтеза и деградации как соединений, образуемых в организме хозяина, так и чужеродных субстанций, участвуют в процессах распознавания, абсорбции и транслокации как полезных, так и потенциально вредных агентов [2, 3, 5]. При этом, как в любом микробиоценозе, в биопленках имеются постоянно обитающие виды бактерий (индигенная микрофлора) и транзиторные виды микробов. В состав кишечного содержимого входят представители 17 семейств, 45 родов и свыше 400 видов микроорганизмов, все они образуют сложнейшую по организации биопленку, и этот факт заставляет нас, например, совершенно по-новому взглянуть на механизм возникновения и причины дисбактериоза кишечника, а также способы его лечения. С этих позиций дисбактериоз нельзя рассматривать как колебания относительного содержания тех или иных видов микроорганизмов. Дисбактериоз кишечника представляет собой кардинальное нарушение строения биопленки слизистой толстого кишечника, а коллективный иммунитет патологической биопленки часто практически сводит на нет возможность коррекции дисбактериозов с помощью пробиотиков (препаратов живых культур основных микроорганизмов кишечника: бифидобактерий, лактобацилл, энтеробактерий и других). Таким образом, для практической медицины преимущество коллективного реагирования имеет и отрицательную сторону. Бактерии в биопленках имеют повышенную выживаемость в присутствии агрессивных веществ, факторов иммунной защиты и антибиотиков. Бактерии и грибы в биопленках выживают в присутствии антибиотиков, в частности, биопленки оказались способными выдерживать концентрации антибиотиков в 100-1000 раз больше терапевтических дозировок, подавляющих одиночные бактериальные клетки [10]. Поскольку свободные бактериальные клетки хуже защищены, чем биопленки, то антибиотик, высокоактивный in vitro при тестировании в чистой культуре, при испытаниях in vivo (когда преобладает фенотип биопленок) может оказаться неэффективным. В этой связи одной из основных проблем практической медицины становится проблема лечения заболеваний микробного происхождения, в тех случаях, когда чувствительность к антибиотикам микроорганизмов, ассоциированных в биопленку, не соответствует таковой, определенной в лабораторных тестах на клинических изолятах чистых культур бактерий. В связи с этим в последние годы идет активное изучение действия антибиотиков на биопленки бактерий, вызывающих патологические процессы различной локализации.

Считается доказанным, что биопленка повышает вирулентность и патогенность всех возбудителей. Подсчитано, что частота инфекций, обусловленных биопленкой, особенно в развитых странах мира, составляет 65%-80% [17]. Многие патогены, такие как E. coli, Salmonella, Yersinia enterocolitica, Listeria, Campylobacter, существуют в форме биопленки на поверхности пищевых продуктов или на поверхности оборудования для их хранения. Кроме того, патогенные бактерии, такие как Staphylococcusaureus, Enterococcus, Streptococcus, E. coli, Klebsiella, Pseudomonas, как правило, растут на катетерах, искусственных суставах, механических клапанах сердца и т.д. [17, 18, 19]. Активность биопленки была зарегистрирована при таких инфекциях, как кариес зубов, кистозный фиброз, инфекции мочевых путей, эндокардит, отит, глазные и раневые инфекции. Продемонстрирована способность H. pylori формировать биопленку на слизистой оболочке желудка и, таким образом, оптимальная антихеликобактерная терапия — это эрадикация биопленки H. Pylori [9, 17, 21, 25]. Возрастающая антибиотикорезис-тентность и развитие бактериальных биопленок являются основными проблемами в лечении инфекций мочевых путей.

В настоящее время идет интенсивное изучение причин такой удивительной устойчивости к антибиотикам у бактерий биопленок. Установлено, что в основе повышенной выживаемости лежат свойства клеток и внеклеточного матрикса. Матрикс биопленки может связывать или не пропускать, и/или инактивировать антибиотики [3, 11, 13]. Устойчивость, обусловленную свойствами клеток биопленки, объясняют уменьшением их свободной поверхности за счет контактов друг с другом и формированием особых бактерий, получивших название персистеров. Персистеры в силу дифференцировки временно становятся устойчивы практически ко всем антибактериальным препаратам [6, 15, 16]. Основными же механизмами повышения устойчивости бактерий к антибиотикам в биопленках являются:1. ограничение проникновения антибиотиков через биопленки; 2. ограничение питания и измененная микросреда в биопленке приводят к уменьшению скорости деления бактерий, вследствие чего остается меньше мишеней для действия антибиотиков;
3. адаптивные реакции; 4. генная изменчивость у персистирующих в биопленке бактерий.

Исходя из накопившихся данных, следует, что антибиотики по действию на бактерии биопленок разделяются на два типа. К первому относят антибиотики, проникающие в биопленки и угнетающие или убивающие образующие их микроорганизмы. Второй тип — антибиотики, практически не проникающие в биопленки, но эффективно препятствующие их расселению за счет мигрирующих бактерий [2, 11, 16]. Таким образом, некоторые антибиотики не проникают в биопленки и не уничтожают существующие сообщества, а только препятствуют увеличению их числа и распространению в организме человека. В связи с этим в последние годы началось изучение способности антибиотиков проникать в биопленки различных микробов. Установлено, что в биопленки Klebsiella pneumoniae плохо проникает ампициллин, а в сообщества Enterococcus faecalis — ампициллин, ко-тримаксозол и ванкомицин [8, 14, 15]. В биопленки ряда микробов плохо проникает широко используемый амоксициллин [16].
К числу антибиотиков, хорошо проникающих через липиды клеток, относятся фторхинолоны. Эта группа антимикробных препаратов способна действовать на основные возбудители урологических заболеваний, в достаточной концентрации проникает в очаг инфекции [9]. Имеющийся опыт использования антибиотиков свидетельствует, что с инфекционным процессом, прежде всего с его клиническими проявлениями, можно справиться с помощью антибиотиков, как проникающих, так и не проникающих в биопленки. Однако разница между ними существует, и она достаточно существенна. Показано, что различия антибиотиков, проникающих и непроникающих в биопленки, могут проявляться в отдаленных результатах лечения. Использование антибиотиков, плохо проникающих в биопленку, очень быстро приводит к формированию и отбору устойчивых штаммов. Кроме того, при этом чаще возникают рецидивы и формируются

очаги хронических процессов.

Таким образом, сейчас очевидно, что повышение эффективности лечения невозможно без тестирования антибиотиков на способность проникать в биопленки, действовать на уже сформированные сообщества и угнетать их образование и расселение. Способность проникать в биопленки и действовать на расположенные внутри и расселяющиеся бактерии является крайне важным свойством антибиотиков, пока, к сожалению, недостаточно исследованным и малоизвестным практическим врачам. Изучена возможность некоторых препаратов, например, кларитромицина, ингибировать образование гликокаликса и его способность в комбинации с цефалоспорином I поколения или ванкомицином препятствовать образованию биопленок на титановом медицинском оборудовании: структура биопленки изменяется, уменьшается количество альгината, гексозы, истончается гликокаликс, тем самым повышается проникновение антимикробного препарата.

Проводятся интенсивные исследования по изучению механизмов образования биопленки. Доктор Стэнли-Wall исследовала гены и белки, необходимые для образования биопленки Bacillus subtilis. Она показала, в частности, что возможность образования биопленки определяет белок под названием DegU [25]. Показано, что SasG белок, располагающийся на поверхности Staphylococcusaureus, вместе с ионами цинка, необходим для построения биопленки [27]. РНК связывающий белок CsrA EscherichiacoliK-12 может быть, в зависимости от условий культивирования, как стимулятором, так и разрушителем биопленки путем воздействия на внутриклеточный биосинтез гликогена. Белок CsgD E.Coli активирует рост фимбрий и синтез внеклеточных полисахаридов, способствуя формированию биопленки [28].

Исследователи из Института Пастера в 2010 г. впервые показали, что некоторые вирусы, в частности HTLV-1 ретровирус, способны образовывать комплексы, похожие на бактериальные биопленки. Благодаря биопленке вирусы защищены от иммунной системы, что позволяет им распространяться от клетки к клетке. Изучение образования вирусных биопленок может определить новую терапевтическую стратегию, которая будет ориентирована не только на вирус, а на вирусную биопленку [26].

Представления о биопленках, подтвержденные с помощью современных методов визуализации, изменили взгляды на инфекционные заболевания. Все новые данные свидетельствуют о том, что хронические инфекции принципиально отличаются от острых образованием биопленок, а фагоциты макроорганизма неспособны поглощать биопленки в отличие от отдельных бактериальных клеток [22]. Существование биопленок при хронических инфекциях требует совершенно новых подходов к их диагностике и лечению. Повышает устойчивость биопленок к вредным факторам также присущее им генетическое и фенотипическое разнообразие, которое позволяет им переносить большинство терапевтических воздействий [23]. Кроме того, традиционные бактериологические методы не выявляют большинство бактерий, участвующих в инфекционном процессе [24]. Новейшие молекулярные, геномные, транскрипционные и протеомные методы позволили определить, что при выделении чистой культуры определяется лишь около 1% клеток патогенного микробиоценоза. В результате лечение нацелено лишь на 1-2 вида бактерий из множества штаммов, присутствующих в составе биопленки (в том числе, возможно, и грибов) [23, 24]. Сейчас не вызывает сомнений необходимость пересмотра концепции патогенеза различных хронических инфекций, внедрив в нее имеющиеся данные о биопленках, что требует использования новых методов диагностики и лечения. Идентифицировать микроорганизмы в составе биопленок позволяют современные молекулярные методы — электрофорез в геле и высокоэффективная жидкостная хроматография с флюоресцентной гибридизацией in situ, эпифлюоресцентная микроскопия, сканирующая электронная микроскопия, конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (CLSM), ПЦР с обратной транскриптазой и другие исследования [7].

Терапевтическое воздействие на биопленки может быть направлено на механизмы первоначальной адгезии бактерий к поверхности, блокирование синтеза или разрушение полимерного матрикса, нарушение межклеточного обмена информацией, а также оно может сочетаться с собственно бактерицидными агентами. Подобное лечение, действующее на структуру или функции биопленок, может оказаться более эффективным, чем стандартная антибактериальная терапия [4]. Таким образом, лечение хронических инфекций в настоящее время уже не может основываться на традиционной концепции микробиологии. Новые представления о биопленках требуют изменения подходов к диагностике и лечению инфекций в самых различных областях медицины.



С.В. Мальцев, Г.Ш. Мансурова

Казанская государственная медицинская академия
 

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
[article[/COLOR][/SIZE][/I][/B]

Ученые из Исследовательского института Скриппса (The Scripps Research Institute) расшифровали сложный химический путь, позволяющий бактериям образовывать кластеры – так называемые биопленки. Это открытие в конечном итоге может способствовать разработке новых фармацевтических препаратов, мишенями которых являются биопленки, участвующие в развитии многих инфекций человека и помогающие бактериям успешно сопротивляться антибиотикам.

«Считается, что на том или ином этапе своего жизненного цикла биопленки образуют около 80 процентов патогенов человека», – объясняет президент и исполнительный директор Института Скриппса Майкл Марлетта (Michael Marletta), PhD, возглавлявший исследование. «В этой работе мы впервые детализировали сигнальный путь от оксида азота к его сенсору, через клеточные регуляторы и далее до биологического результата – образования биопленок».[/article]
 

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
Article:
В. В. Тец, Г. Ю. Кнорринг, Н. К. Артеменко, Н. В. Заславская, К. Л. Артеменко
Влияние экзогенных протеолитических ферментов на бактерии

Для стандартных штаммов и бактерий, изолированных от больных, были получены результаты с рядом характерных особенностей. Общим оказалось снижение выживаемости бактерий в биопленках в присутствии антибиотиков и ферментов, взятых в концентрациях, при которых они по отдельности почти не изменяли числа КОЕ в сообществе. Этот эффект зарегистрирован как у грамотрицательных, так и у грамположительных бактерий. В присутствии папаина число КОЕ в биопленках при действии различных антибиотиков снижалось в среднем в 2–4 раза, а в присутствии вобэнзима — в 2–10 раз. Наибольшее усиление действия в присутствии вобэнзима зарегистрировано у гентамицина.
Полученные результаты свидетельствуют, что ферменты в небольших концентрациях могут не только частично угнетать образование биопленок, но и усиливать действие на них различных неродственных антибиотиков. Такой эффект имеет важное практическое значение, поскольку в организме человека к моменту появления симптомов заболеваний бактерии всегда уже проходят стадию колонизации и находятся в составе различных моно- и смешанных микробных сообществ, отграниченных от внешней среды. Испытанные ферменты примерно в одинаковой мере увеличивали эффективность действия различных неродственных антибиотиков, что свидетельствует о неспецифичном общем увеличении поступления препаратов в биопленки.
Таким образом, применение ферментов, не влияющих на жизнеспособность или чувствительность отдельных микроорганизмов к антибиотикам, можно считать полезным для эффективной борьбы с бактериальными инфекциями.
 
Последнее редактирование:

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
Боррелия - не исключение из микроорганизмов, способных создавать биопленки
Article:
BORRELIA BURGDORFERI (LYME DISEASE) BIOFILM
Thursday, 3 October 2013

Dr Alan MacDonald:
Biofilms of borrelia are Communities. Within each biofilm Community there is microbe Specialization.
Biofilm infections are ALWAYS CHRONIC INFECTIONS.
Biofilm infections are Never Cured by simple short course Antibiotic Therapies.

Borrelia Burgdorferi Biofilm - Live Microscopy Video
Published on Oct 2, 2013

Eva Sapi, Ph.D., Associate Professor of Biology and Environmental Science at the University of New Haven, hosted my visit 2008. She collaborated with Dr. Alan MacDonald, retired pathologist and Borrelia career researcher, to discover and prove that Borrelia creates biofilms, as microbes have been doing for three billion years.

This video shows four different life forms alive in the community: spirochetes, cysts, granular and of course the biofilm community itself. Biofilms protect the microbial community from the immune system and antibiotics, which enable infections to live indefinitely inside us.
 

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
Article:
Borrelia burgdorferi form biofilms
oct 24, 2012

Bacteria have been shown to form biofilms, complex groups of microorganisms that may form in hostile environments and be protective to the bacteria, but to date, had not been proven to be formed by Borrelia burgdorferi (Bb). A new study out of University of New Haven led by Dr. Eva Sapi has now demonstrated that Bb is capable of such formation and that such formation may play a role in their survival in adverse environmental conditions. LDA provided grant support for the work.


Characterization of Biofilm Formation by Borrelia burgdorferi In Vitro

 

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
Biofilms of Borrelia burgdoferi and Clinical Implications for Chronic Borreliosis
Alan B.MacDonald, MD


Внимание! Заметьте авторские права! Копирование и использование материалов презентации только с разрешения автора.


На стр.48 АСА - биопленки боррелий.
 

Ирина

Уважаемый форумчанин
Сообщения
2.668
Лайки
741
Баллы
128
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Опубликовано в журнале:АтмосферА. Пульмонология и аллергология 3*2008
Биопленки - терапевтическая мишень при хронических инфекциях
Н.А. Вознесенский Николай Арнольдович Вознесенский – канд. мед. наук, зав. лабораторией НИИ пульмонологии ФМБА России.
Более 150 лет назад Роберт Кох разработал метод чистой культуры для выделения индивидуальных штаммов бактерий. Эти подходы и по сей день широко используются в микробиологии, однако рост отдельных клеток планктонных (свободно плавающих) бактерий в среде, богатой питательными веществами, существенно отличается от их существования в естественных условиях, в том числе в организме человека. Обычно планктонный фенотип бактерий встречается лишь транзиторно и в минимальном количестве, тогда как преимущественно бактериальные популяции представляют собой биопленки – полимикробные фиксированные сообщества микроорганизмов, внедренные в синтезированный ими полимерный матрикс. Такая форма существования предоставляет бактериям массу преимуществ в условиях воздействия неблагоприятных факторов внешней среды и организма-хозяина. Представления о биопленках, подтвержденные с помощью современных методов визуализации, изменили взгляды на инфекционные заболевания. Всё новые данные свидетельствуют о том, что хронические инфекции принципиально отличаются от острых, а существование биопленок при хронических инфекциях требует совершенно новых подходов к их диагностике и лечению [1].
Биопленкой называют тонкий слой микроорганизмов с секретированными ими полимерами, который адгезирован к органической или неорганической поверхности. Впервые свойства биопленок исследовали Costerton J.W. et al., изучив внеклеточные полимерные вещества, удерживающие вместе сообщество бактерий [2]. Биопленки – это основной фенотип почти всех бактерий в естественных условиях обитания, как во внешней среде, так и в организме человека при патологии. Биопленки предоставляют защиту от факторов внешней среды и могут включать микроорганизмы разных царств (например, бактерии и грибы). Благодаря существованию в виде биопленок популяция бактерий усиливает свою защиту от фагоцитоза, ультрафиолетового излучения, вирусов и дегидратации, а также от антибиотиков и факторов иммунной защиты макроорганизма. В частности, биопленки оказались способными выдерживать концентрации антибиотиков в 100-1000 раз больше, чем подавляющие планктонные клетки [3]. Аналогичным образом, фагоциты макроорганизма неспособны поглощать биопленки в отличие от отдельных бактериальных клеток. Повышает устойчивость биопленок к вредным факторам присущее им генетическое и фенотипическое разнообразие, которое позволяет им переносить большинство терапевтических воздействий [4].
Всё больше накапливается доказательств, что выделенная чистая культура бактерий совпадает с биопленкой только по небольшому числу свойств. Когда бактерии переходят от планктонного фенотипа к формированию биопленки, процессы их биосинтеза радикально меняются. Клетки начинают синтезировать полимеры, защищающие их и связывающие между собой и с подлежащей поверхностью. Кроме того, клетки (даже разных видов) обмениваются между собой информацией с помощью феромонов и других сигнальных молекул. Скоординированная активность сообщества микробов делает биопленки малоуязвимыми для факторов защиты макроорганизма [1].
Представления о планктонном существовании бактерий накладывают ограничения на диагностические и терапевтические возможности современной медицины. Поскольку планктонные клетки хуже защищены, чем биопленки, то антибиотик, высокоактивный in vitro при тестировании в чистой культуре, при испытаниях in vivo (когда преобладает фенотип биопленок) может оказаться неэффективным. Этим может объясняться по крайней мере часть различий в результатах испытаний антибиотиков in vitro и в клинических условиях [5, 6].
Кроме того, традиционные бактериологические методы не выявляют большинство бактерий, участвующих в инфекционном процессе [7, 8]. Новейшие молекулярные, геномные, транскрипционные и протеомные методы позволили определить, что при выделении чистой культуры определяется лишь около 1% клеток патогенного микробиоценоза. В результате лечение нацелено лишь на 1-2 вида бактерий из множества штаммов, присутствующих в составе биопленки (в том числе, возможно, и грибов).
Наконец, ограниченные возможности культуральных методов приводят в ряде случаев к ошибочному или неполному диагнозу. Поскольку эти методы не выявляют те бактерии в составе биопленок, которые жизнеспособны, но не культивируются, то зачастую делается заключение о "стерильном воспалении" или вирусной инфекции (например, при среднем отите или простатите) [9].
Сейчас не вызывает сомнений необходимость пересмотреть концепцию патогенеза различных хронических инфекций, внедрив в нее имеющиеся данные о биопленках. В практическом отношении это требует использования новых методов диагностики и лечения. Среди методов, которые позволяют идентифицировать микроорганизмы в составе биопленок, можно назвать современные молекулярные методы (электрофорез в геле и высокоэффективная жидкостная хроматография с флюоресцентной гибридизацией in situ). В клинических лабораториях всё шире используются полимеразная цепная реакция (ПЦР), ПЦР с обратной транскриптазой, быстрое секвенирование и другие исследования [7].
Терапевтическое воздействие на биопленки может быть направлено на механизмы первоначальной адгезии бактерий к поверхности, блокирование синтеза или разрушение полимерного матрикса, нарушение межклеточного обмена информацией, а также оно может сочетаться с собственно бактерицидными агентами. Подобное лечение, действующее на структуру или функции биопленок, может оказаться более эффективным, чем стандартная антибактериальная терапия [4].
Концепция биопленок затрагивает инфекционные поражения большинства органов (верхних дыхательных путей, легких, сердца, почек, кожи, костей, системы пищеварения) и практически всех искусственных имплантатов. Среди всех инфекционных поражений около 65-80% вызываются бактериями, формирующими биопленки [1, 11]. При таких, на первый взгляд, совершенно различных заболеваниях, как пневмония, цистит и инфицированный протез коленного сустава, благодаря общности патогенеза могут использоваться сходные стратегии лечения, сфокусированные на подавление биопленок.
Активностью в отношении биопленок обладает N-ацетилцистеин (Флуимуцил). Этот препарат, известный как муколитик и антиоксидант, оказался способен противостоять формированию и даже разрушать биопленки. В опытах in vitro N-ацетилцистеин подавлял способность Staphylococcus epidermidis образовывать биопленки, этот эффект зависел от концентрации препарата и был подтвержден данными электронной микроскопии [12]. N-ацетилцистеин не только самостоятельно подавляет образование и разрушает уже сформированные биопленки Escherichia coli, но и значительно усиливает бактерицидную активность фосфомицина [13]. В клинических условиях влияние N-ацетилцистеина в сочетании с тиамфениколом (Флуимуцил-антибиотик) на инфекцию, сопровождающуюся формированием биопленок, изучали у больных (n = 102) с рецидивирующими инфекциями верхних дыхательных путей [14]. Флуимуцил-антибиотик в 1-й день вводили внутримышечно, а затем – ингаляционно в течение 10 дней. Формирование биопленок in vivo было подтверждено результатами сканирующей электронной микроскопии у 24 пациентов, у которых были выделены штаммы Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae. Среди этих пациентов клиническое и бактериологическое излечение при терапии Флуимуцил-антибиотиком было достигнуто у 21 (87,5%), а неудача в 3 случаях была обусловлена присутствием штаммов S. aureus (in vitro чувствительных к тиамфениколу). Предположительно, механизмы активности N-ацетилцистеина против биопленок связаны с тем, что он нарушает адгезию бактерий к поверхности, разрушает внеклеточные полисахариды биопленок и даже тормозит их синтез бактериями [15]. По-видимому, исследования активности Флуимуцила против бактерий, образующих биопленки, будут продолжаться, а одним из наиболее перспективных направлений исследования следует считать инфекцию Pseudomonas aeruginosa у больных муковисцидозом, бронхоэктазией и другими легочными заболеваниями.
Итак, лечение хронических инфекций в настоящее время уже не может основываться на планктонной концепции микробиологии. Представление о биопленках изменяет подходы к диагностике и лечению инфекционных поражений в самых различных областях медицины. Этому способствует разработка соответствующих методов молекулярной диагностики, а также стратегий лечения, воздействующих на механизмы формирования и функционирования бактериальных сообществ в виде биопленок.


----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
 
Последнее редактирование:

Lana

Ветеран форума
Сообщения
12.947
Лайки
6.288
Баллы
129
Во какой дозе его принимать (это как я понимаю, АЦЦ)?
 

Vatrushka

Модератор
Сообщения
8.733
Лайки
7.204
Баллы
128
Азитромицин воздействует на биопленки.
В статье описано действие азитромицина против других бактерий в биопленках. Но, думаю, нам такие новости об этом АБ тоже пригодятся:thumbsup:

Article:
Азитромицин и биопленки

В настоящее время в понимании патогенеза различных инфекционных заболеваний всё большую популярность приобретает концепция бактериальных биоплёнок. Впервые о роли бактериальных биоплёнок при различных инфекциях заговорили более 25 лет назад. В настоящее время считается, что более 65% всех инфекционных заболеваний обусловлены микроорганизмами, существующими в форме биоплёнок [1]. К числу заболеваний, связанных с присутствием биоплёнок, относятся инфекции мочевых путей (вызванные E. coli и другими бактериями), мочекаменная болезнь, катетер-ассоциированные инфекции кровотока — КАИК (золотистый и коагулазонегативные стафилококки, другие бактерии и грибы рода Candida), стоматологические проблемы (зубной камень, кариес, гингивит), хронический простатит, инфекции среднего уха у детей (обусловленные, например, Haemophilus influenzae), хронический синусит, хроническая обструктивная болезнь лёгких (ХОБЛ), муковисцидоз, инфекционный эндокардит, хронический остеомиелит, инфекции протезированных клапанов и суставов и т.д. [2].

Бактериальные биоплёнки — это высокоупорядоченные сообщества бактерий, формирующиеся на биологических или искусственных поверхностях в результате адгезии, роста и размножения микроорганизмов и образования полисахаридного внеклеточного матрикса. Бактерии в составе биоплёнок отличаются значительно более высокой устойчивостью к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды, в том числе антимикробных препаратов [3]. В процессе своего существования бактериальные биоплёнки способны периодически высвобождать планктонные формы бактерий, что служит источником поддержания хронического инфекционного и воспалительного процесса.

Формирование и сохранение структурной целостности бактериальной биоплёнки зависит от процесса, получившего название кворум-сенсинга (quorum sensing — «ощущение кворума»). Кворум-сенсинг означает восприятие клетками изменений среды, которые наступают при достижении бактериальной культурой некоторой пороговой численности, и реакцию на эти изменения [4]. Достаточно подробно изучены реакции кворум-сенсинга для биоплёнок, образованных Pseudomonas aeruginosa, являющейся основным патогеном у пациентов с муковисцидозом. Образование многих внеклеточных факторов вирулентности Р. aeruginosa в биоплёнке контролируется системами межклеточного взаимодействия, центральными компонентами которых служат las- и rhl-системы кворум-сенсинга, активирующие экспрессию генов в зависимости от величины плотности клеток микроорганизма. Именно воздействием на эти системы принято объяснять эффективность применения азитромицина у пациентов с муковисцидозом [5,6,7]. Однако, механизм благоприятного действия азитромицина у пациентов с хроническими инфекциями, связанными с биоплёнками, окончательно не установлен; не исключено, что иммуномодулирующие свойства данного антибиотика также способствуют подавлению хронического воспаления и связанного с ним повреждающего воздействия бактериальных патогенов на пораженные ткани [8,9].

Назначение азитромицина может оказаться полезным не только у пациентов с муковисцидозом, но и для профилактики вентилятор-ассоциированной пневмонии (ВАП), вызванной штаммами синегнойной палочки. Так, в 2010 г. на конгрессе Американского торакального общества были представлены данные о том, что применение азитромицина в периоперационном периоде при кардиохирургических операциях у детей с врождёнными пороками сердца (ВПС) достоверно уменьшает риск развития ВАП (4,5% vs 12,2% в контрольной группе), нозокомиальных инфекций в целом (9,1% vs 30,9%), а также длительность ИВЛ, пребывания в ОРИТ и общую длительность пребывания в стационаре [10].

Полученные в экспериментальных исследованиях данные позволяют предположить, что азитромицин обладает уникальными свойствами, обеспечивающими его эффективность при инфекциях, связанных с биоплёнками. Эти свойства далеко не всегда присутствуют у других макролидных антибиотиков. Среди более чем 20 исследованных антимикробных препаратов только у азитромицина и, в меньшей степени, у кларитромицина была отмечена способность в субингибирующих концентрациях нарушать образование биоплёнки штаммами P. aeruginosa [11].

Важным респираторным патогеном, также способным формировать биоплёнки, является гемофильная палочка (H. influenzae). Показано, что формирование биоплёнок играет важную роль в патогенезе рецидивирующего и хронического среднего отита [12,13], хронического риносинусита и полипоза придаточных пазух носа [14,15], тонзиллита и аденоидита [15], прогрессирования и развития инфекционных обострений ХОБЛ [16]. В связи с этим существенный практический интерес представляют результаты экспериментальной работы Starner с соавт., продемонстрировавшие, что субингибирующие концентрации азитромицина (0,125 мг/л) препятствуют образованию биоплёнки нетипируемыми штаммами H. influenzae, а также способствуют уменьшению уже сформированной биоплёнки [17]. Наблюдаемые эффекты не зависели от чувствительности штамма гемофильной палочки к азитромицину и отмечались как у штаммов, чувствительных к данному антибиотику, так и у резистентных к нему лабораторных мутантов H. influenzae (с МПК азитромицина >64 мг/л).

Наиболее интересным фактом, обнаруженным в данной работе, является способность азитромицина вызывать уменьшение массы и толщины уже сформированной нетипируемыми штаммами H. influenzae биоплёнки. Подобный эффект не был отмечен в экспериментах с P. aeruginosa [7]. Способность азитромицина не только препятствовать образованию биоплёнки, но и вызывать её уменьшение при инфекциях, связанных с H. influenzae, даёт дополнительные основания для применения азитромицина при хронических инфекциях дыхательных путей и ЛОР-органов, поскольку на момент начала лечения биоплёнка во многих случаях уже сформирована. В то же время сравнительных рандомизированных контролируемых исследований, демонстрирующих клиническую эффективность азитромицина при хронических инфекциях ЛОР-органов, связанных с биоплёнками, до настоящего времени проведено не было, и режимы применения препарата для таких случаев не разработаны. Необходимы дальнейшие исследования в этом направлении, которые позволят оценить эффективность подобной тактики и потенциальные риски её применения, как для отдельного пациента (безопасность и переносимость), так и для общества в целом (развитие антибиотикорезистентности).
 
Последнее редактирование:

Vatrushka

Модератор
Сообщения
8.733
Лайки
7.204
Баллы
128
Ацетилцистеин. Муколитик , разжижающий мокроту
 
Последнее редактирование:

Lana

Ветеран форума
Сообщения
12.947
Лайки
6.288
Баллы
129
Принимала препарат АЦЦ во время АБ и сейчас с травами, в дозе 600.
 

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
Во какой дозе его принимать (это как я понимаю, АЦЦ)?
Скажите ,пожалуйста, что такое АЦЦ?

Читайте статью выше, которую выложила Ирина - Активностью в отношении биопленок обладает N-ацетилцистеин (Флуимуцил). Этот препарат, известный как муколитик и антиоксидант, оказался способен противостоять формированию и даже разрушать биопленки.

Одной пациентке ВСА назначали: 200мг 3 раза в день первую неделю + антибиотики, потом 3 недели пить одни антибиотики. Затем 200мг 3 раза в день первую неделю второго месяца+ антибиотики. Т.е. антибиотики постоянно, а этот препарат в начале и середине курса.
Где-то на форуме была и другая схема. Если я помню, то в такой же дозировке без перерывов.
 

Vatrushka

Модератор
Сообщения
8.733
Лайки
7.204
Баллы
128
Ученые не могут создать дез.средства которые смогут разрушать биопленки на поверхности предметов медицинского назначения. Ни хлор их не берет, ни кислоты..Т.е даже снаружи проблема актуальная, что уж говорить про "внутри" :(

Под биопленкой понимается сообщество микроорганизмов, внедренное в синтезированный ими полимерный матрикс. Бактерии составляют от 5 до 35 процентов массы биопленки, остальная ее часть — это межбактериальный матрикс. Микроорганизмы могут образовывать биопленки как на органической, так и на неорганической поверхности.

Эта форма существования позволяет микроорганизмам выжить при воздействии неблагоприятных факторов внешней среды и организма-хозяина. Так, они становятся устойчивыми к антибактериальным и дезинфицирующим средствам, к действиям среды с различными значениями pH и даже к воздействию иммунной системы хозяина. Биопленки, образующиеся на имплантируемых медицинских изделиях (катетерах, искусственных клапанах сердца, линзах и так далее), приводят к развитию тяжелых, трудно излечимых хронических заболеваний
1. отслоение биопленок в кровотоке или мочевыводящем тракте может приводить к формированию эмболов;
2. бактерии в биопленках могут обмениваться плазмидами резистентности (передача резистентности от вида к виду);
3. биопленки могут снижать чувствительность бактерий к антимикробным агентам от 100 до 1000 раз.;
4. биопленки с Гр "-" бактериями могут продуцировать эндотоксин, что может приводить к инфекционно-токсическому шоку;
5. бактерии в биопленке не поддаются воздействию иммунной системы хозяина.
Тактики диагностики и лечения, используемые для борьбы с острыми инфекциями, не эффективны в эррадикации инфекций с биопленками на медицинских устройствах и при хронических инфекциях.3
По современным представлениям, основу нормальной микрофлоры человека составляют облигатные анаэробные бактерии, количество которых достигает 10 в 13 степени -10 в 14 степени, что на 1-2 порядка превышает количество эукариотических клеток всех тканей и органов человека вместе взятых
Article:
Сейчас не вызывает сомнений необходимость пересмотра концепции патогенеза различных хронических инфекций, внедрив в нее имеющиеся данные о биопленках, что требует использования новых методов диагностики и лечения.


В РФ тоже есть небольшие исследования по применению N-ацетилцистеина в лечении некоторых инфекций(дых.путей) с формированием биопленок.

Article:
Как было установлено в последнее время в экспериментальных и клинических исследованиях,
препарат обладает способностью уменьшать адгезию некоторых возбудителей к
слизистым оболочкам дыхательных путей, а также оказывает прямое разрушающее воздействие на внеклеточный матрикс, что позволяет рассматривать N-ацетилцистеин в качестве перспективного неантибактериального компонента терапии инфекций, связанных с образованием биопленок
 
Последнее редактирование:

Vatrushka

Модератор
Сообщения
8.733
Лайки
7.204
Баллы
128
ВЛИЯНИЕ НА БАКТЕРИАЛЬНЫЕ БИОПЛЕНКИ
14- и 15-членные макролиды тормозят образование альгината биопленок, которые формирует P.aeruginosa. Вероятным механизмом такого действия является ингибирование одного из ферментов, участвующих в синтезе альгината, - гуанозин-D-манноза-дегидрогеназы.
Именно антиальгинатное и, следовательно, антибиоплёночное действие обеспечивает клиническую эффективность макролидов при диффузном панбронхиолите и, возможно, муковисцидозе, так как в патогенезе и клинике этих заболеваний существенное значение имеет иммунная реакция, вызванная альгинатом слизи.
Кларитромицин обладает способностью разрушать полисахаридный матрикс бактериальных биопленок (на примере биопленок с H. pylori) , тем самым значительно увеличивая его проницаемость для других специфических антибактериальных средств
 
Последнее редактирование:

Julia ~

Ветеран форума
Сообщения
7.457
Лайки
5.355
Баллы
128
Протоколы и средства растворения биопленок при Лайм-боррелиозе

Biofilm
Biofilm is a slimy and gluey substance that Borrelia Burgdorferi generates to shield itself from antibiotics and the immune system. Borrelia can also hide in other microbial’s biofilm and vice versa. Fibrin, a protein our bodies create for blot clotting, is the basic building material used for generating Biofilm. The Biofilm is designed to adhere to human tissue where damage to the tissue and inflammation occur.

Within the Biofilm, Borrelia is capable of talking with its own species or other bacteria and carrying out offensive actions. Borrelia can also receive and swap genetic information such as drug resistant genes. Its reproduction cycle, given that it’s every few weeks, can yield drug resistant strains in only a few generations. This could explain why years of antibiotics can’t rid the infection.

The Biofilm also houses Borrelia in cyst form and co-infections such as Mycoplasma.

False negative test results
Biofilm is capable of protecting Borrelia from the immune system, our antibody generator. The Western Blot and Elisa Test use antibodies as an indication for Lyme Disease. If no antibodies are created, tests will yield negative results despite having full blown Lyme Disease.

Ineffective Antibiotics
Antibiotics, conventional or holistic, can only kill the bacteria when it is exposed. If Borrelia is concealed within a Biofilm, antibiotics have no way of penetrating and become ineffective. In order for antibiotics to kill the bacteria that resides within the Biofilm, it will require the assistance of a Biofilm dissolver.

Biofilm dissolvers
Biofilm dissolvers are capable of breaking up the Biofilm and exposing the Borrelia to antibiotics and the immune system. Antibiotics and the immune system must work in conjunction with Biofilm dissolvers in order to implement their total effectiveness and functionality.

Holistic Biofilm Dissolvers

Serrapeptase – Serrapeptase is an enzyme produced by serratia bacteria in the intestines of silkworms. The enzyme only dissolves dead or damaged tissue such as Fibrin, the building blocks for Biofilm. Once the enzyme dissolves the fibrin, Borrelia is exposed to antibiotics and the immune system.

Lumbrokinase – Lumbrokinase is an enzyme produced by earthworms. It is commonly used for breaking up biofilm by dissolving the fibrin that it consists of. Lumbrokinase is said to be more powerful than Nattokinase.

Nattokinase – Nattokinase is an enzyme produced from Natto, a Japanese food made from fermented soybeans. It is commonly used for breaking up Biofilm by dissolving the fibrin it consists of.
Conventional Biofilm Dissolvers

Tindamax – Tindamax is a prescription drug capable of dissolving Biofilm but is more widely used as a Lyme cyst buster.

См. также
 
Последнее редактирование модератором:

Саша

Завсегдатай
Сообщения
123
Лайки
28
Баллы
43
Протоколы и средства растворения биопленок при Лайм-боррелиозе

Biofilm
Biofilm is a slimy and gluey substance that Borrelia Burgdorferi generates to shield itself from antibiotics and the immune system. Borrelia can also hide in other microbial’s biofilm and vice versa. Fibrin, a protein our bodies create for blot clotting, is the basic building material used for generating Biofilm. The Biofilm is designed to adhere to human tissue where damage to the tissue and inflammation occur.

Within the Biofilm, Borrelia is capable of talking with its own species or other bacteria and carrying out offensive actions. Borrelia can also receive and swap genetic information such as drug resistant genes. Its reproduction cycle, given that it’s every few weeks, can yield drug resistant strains in only a few generations. This could explain why years of antibiotics can’t rid the infection.

The Biofilm also houses Borrelia in cyst form and co-infections such as Mycoplasma.

False negative test results
Biofilm is capable of protecting Borrelia from the immune system, our antibody generator. The Western Blot and Elisa Test use antibodies as an indication for Lyme Disease. If no antibodies are created, tests will yield negative results despite having full blown Lyme Disease.

Ineffective Antibiotics
Antibiotics, conventional or holistic, can only kill the bacteria when it is exposed. If Borrelia is concealed within a Biofilm, antibiotics have no way of penetrating and become ineffective. In order for antibiotics to kill the bacteria that resides within the Biofilm, it will require the assistance of a Biofilm dissolver.

Biofilm dissolvers
Biofilm dissolvers are capable of breaking up the Biofilm and exposing the Borrelia to antibiotics and the immune system. Antibiotics and the immune system must work in conjunction with Biofilm dissolvers in order to implement their total effectiveness and functionality.

Holistic Biofilm Dissolvers

Serrapeptase – Serrapeptase is an enzyme produced by serratia bacteria in the intestines of silkworms. The enzyme only dissolves dead or damaged tissue such as Fibrin, the building blocks for Biofilm. Once the enzyme dissolves the fibrin, Borrelia is exposed to antibiotics and the immune system.

Lumbrokinase – Lumbrokinase is an enzyme produced by earthworms. It is commonly used for breaking up biofilm by dissolving the fibrin that it consists of. Lumbrokinase is said to be more powerful than Nattokinase.

Nattokinase – Nattokinase is an enzyme produced from Natto, a Japanese food made from fermented soybeans. It is commonly used for breaking up Biofilm by dissolving the fibrin it consists of.
Conventional Biofilm Dissolvers

Tindamax – Tindamax is a prescription drug capable of dissolving Biofilm but is more widely used as a Lyme cyst buster.

Так может успешно кушать дождевых червей с их ферментами?
 
Последнее редактирование модератором:
Сверху Снизу